报告基因:β-半乳糖苷酶的原位染色实验——原位染色技术
β-半乳糖苷酶的原位染色可应用于:(1)确定导人的DNA是否已被整合到宿主细胞;(2)来示踪细胞与细胞相互作用。
实验方法原理 | β-半乳糖苷酶是一种常用的报告基因分子,通过原位染色,在普通的光学显微镜下就可以用于检测到β-半乳糖苷酶的表达。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、材料
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注意事项 | 1. β-Gal Fixative有一定的腐蚀性和气味,操作时请注意防护。 2. β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH条件,不能在二氧化碳培养箱中进行染色反应。用于细胞培养的二氧化碳培养箱中较高浓度的二氧化碳会影响染色工作液的pH值,而导致染色失败。 3. 配制染色工作液时需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,不宜使用聚苯乙烯(polystyrene)容器。但染色时可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中进行,例如普通的6孔板就可以用作染色的容器。 |
其他 | 1. 一种基于衰老时SA-β-Gal (senescence-associated β-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测。 2. 对于组织切片:(1) 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡和水化处理。对于冷冻切片直接按照以下步骤进行。 (2) 加入适当体积的β-半乳糖苷酶染色固定液,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于15分钟。(3)用PBS浸泡洗涤组织3次,每次不少于5分钟。(4)普通光学显微镜下观察。如不能及时观察,加上封片液封片后4℃可以保存较长时间。 来源《动物细胞培养:基础技术指南(第五版)》 展开 |