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梅毒实验室检测技术评价

2019.12.22

梅毒是一种经输血或使用血制品以及性传播的传染病,因此梅毒抗体检测是献血员必不可少的检测项目。梅毒的病原体是梅毒螺旋体(treponema pallidum,TP),其含有表面抗原,能刺激机体产生两类抗体,一类为螺旋体的特异性抗体;另一类为螺旋体的非特异性抗体。根据梅毒螺旋体的生物学及免疫学特性,目前国内实验室常用的梅毒螺旋体检测方法,根据所用抗原不同主要分为特异性和非特异性两大类。

1、梅毒螺旋体抗原血清试验用活的或死的梅毒螺旋体或其成分来作抗原测定抗螺旋体抗体

这种试验敏感性和特异性均高,一般用作确认试验。这种试验是检测血清中抗梅毒螺旋体IgG或IgM抗体,该抗体即使患者经过足够治疗,仍能长期存在,甚至终身不消失,血清反应持续存在阳性。适用于血站献血员的筛查。

1.1 荧光密螺旋体抗体吸收试验(fluorescent treponemal anti-body-absorption test,FTA-ABS)是以Reiter 株抗原吸收待检血清,保证了试验结果的特异性;以整条梅毒螺旋体检测血清中抗体,提高了试验的敏感性。文献报道FTA—ABS对各期梅毒检测的特异性达到92%,它的主要缺点是需荧光显微镜设备,当标本荧光微弱病情可疑时,试验结果判定常带有主观色彩。另外,还有报道其提取物为活菌,存在一定危险性.故其应用受到很大限制。美国常用此试验作为梅毒的确认试验。

1.2 梅毒螺旋体血球凝集试验(treponema pallidum hemagglu-tination assay,TPHA)是用生物细胞(火鸡或羊红细胞)做抗原载体,吸附从兔睾丸中提取的粗制梅毒螺旋体粉碎物抗原,检测血清中特异性梅毒螺旋体抗体.是目前国内许多医院常用的梅毒血清确认试验。试剂制备过程排除了各种非特异性反应.因此TPHA的敏感性和特异性较高。缺点是试剂成本较高,操作较麻烦,不利于献血员大量标本的筛查。且易发生自凝现象和生物学假阳性。另外,其测定过程中包括多次吸液过程,易造成操作者差错,结果又依赖于操作者肉眼判断和解释,而且结果不易于保存,尤其不利于实验室作为资料保存。

1.3 梅毒螺旋体明胶凝集试验(treponema pallidum particle agglutination,TPPA)TPPA作为梅毒抗体检测的确证方法,有着很高的敏感度和特异性,操作较简便。结果清晰易判断,但价格昂贵且结果判断难以自动化。

1.4 梅毒螺旋体免疫印迹试验(western immunoblotting tech-nique)是80年代发展起来的一种检测技术,它结合了免疫学和分子生物学的特点,敏感性高,特异性强。有报道认为免疫印迹法用于梅毒诊断优于FTA—ABS和TPHA方法,对早期潜伏梅毒、神经梅毒的阳性率均为100%,对于非螺旋体标本(包括正常标本、生物学假阳性标本以及γ球蛋白增高或抗核抗体的标本)检测没有假阳性或可疑反应。免疫印迹法操作简便,不要求试验仪器和环境,结果容易判定,但成本较高。

1.5 梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,TP-ELISA)TP-ELISA方法检测梅毒螺旋体最早出现于1975年,是用双抗原夹心法测定梅毒特异性抗体。TP-ELISA方法主要检测梅毒螺旋体IgG和IgM抗体,文献报道TP-ELISA方法的敏感性高于FTA-ABS方法用,对I 期梅毒的诊断灵敏度为93.8%.诊断特异性为100%。TP-ELISA方法检测操作简便,不受样本中纤维蛋白和溶血等影响。一次可进行多份样本的检测,用酶标仪分析,客观准确,结果便于保留及标准化管理,可用作筛查和确认试验。因此,TP-ELISA方法被公认为梅毒血清学诊断实验的首选方法。

1.6 胶体金免疫技术(TPAb)是在酶免结合基础上发展起来的.利用免疫胶体金技术和免疫层析原理。通过硝酸纤维素上包被特异性梅毒基闪重组抗原,以检测标本中特异性的梅毒抗体。众所周知,近年来梅毒的发病率逐年上升,为防止流动采血车的血源浪费.我们需要一种更为快速、便捷、特异、敏感的方法来满足实际工作的需求,而梅毒螺旋体特异性抗体胶体金法(TPAb)则具有简单、快速、不需任何仪器的特点,其敏感性,特异性,准确性都较高。因此,可推荐应用于流动采血车。

2、螺旋体抗原血清试验用心磷脂作抗原。测定血清中抗心磷脂抗体.此类试验为非特异性抗体检测试验

2.1 快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)是80年代问世的非特异性梅毒血清学试验,所用抗原为标准的牛心肌脂抗原,该方法操作简便、迅速,适用于大量标本检测,目前许多血站用RPR试验对献血者进行梅毒普查。缺点是当感染者接受治疗或疾病处于非活动期时,抗体水平会迅速下降或消失,容易出现假阴性反应,即前带现象(prozone phenomenon),从而造成漏检;还易出现生物学假阳性反应。对潜伏期梅毒、神经梅毒不敏感。

2.2 甲苯胺红不加热血清反应素试验(TRUST) TRUST所用的抗原是从牛心提取的心磷脂和从鸡蛋黄提取的卵磷脂及胆周醇,试验结果清晰易读,简便快速,稳定性好,TRUST法比RPR效价测定高一个滴度。缺点是许多因素影响结果,如高脂血症和抗心磷脂抗体阳性的血清均可干扰而出现假阳性结果柳。

3、基因诊断技术检测梅毒螺旋体(TP—PCR)

TP-PCR检测梅毒螺旋体DNA,特异性很强,敏感性很高,是目前诊断梅毒螺旋体的先进方法。PCR检测梅毒螺旋体的DNA,其敏感性、特异性均优于血清学方法。由于临床标本可能含有大量人细胞和微生物,建立对梅毒螺旋体高度特异的PCR方法是很重要的。但不利于血站大批量的标本检测。

总之,对于梅毒检测选择一种敏感性和特异性均高的检测方法非常重要。以上几种检测方法各有优缺点。实验人员可根据各自的需求选择实验方法。研究人员仍在继续寻找更为敏感、准确、全面的检测方法。


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