血清替代品：XerumFree XF205培养基添加物使用说明（一）
以下翻译仅供参考！最终使用者请参看英文原文说明书。
使细胞能在无血清环境中生长
确保无动物成分且经过GMP认证的细胞培养添加物
细胞的无血清培养具有一定的挑战性。这篇文章的目的是指导终端使用者平稳过渡到无血清环境中，且避免所有不足的或不恰当的努力。
理想的过渡到无血清环境下应该经历几个阶段，逐渐地筛选使细胞生长在无血清环境下。然而，如果所有关键步骤都能很好的解决，直接过渡到无血清环境下也有可能会成功。
无论使用什么方法，关键点包括细胞接种的生长状态，细胞接种密度，继代培养技术和细胞培养体系的生物物理属性。
TNCbio’s XerumFreeTM血清替代品已经作为一种培养基添加物使用，使用方法跟传统的细胞培养血清一样。然而浓度是5倍浓缩液，因此你可以添加2%浓缩液到常规培养基中，操作步骤跟平常一样。
内容
使用前重点注意事项
1 制备
1.1 常规的细胞培养基的制备
1.2 过渡到无血清环境下的常规调整方法
1.2.1 直接过渡
1.2.2 后续调整
2 XF205的使用
2.1 细胞系
2.1.1 贴壁依赖型细胞系
2.1.2 贴壁非依赖型细胞系
2.2 干细胞
2.2.1 准备步骤—包被
2.2.2 hESCs和hiPSCs的培养
2.2.3 MSCs的培养
2.3 原代细胞培养
2.3.1 普通建议
2.3.2 细胞培养的具体建议
2.3.3 推荐的体系
使用浓缩的XerumFreeTM XF205之前的重点注意事项：
--XF205是一种替代血清的细胞培养基附加物，并不是最终的培养基。
--XF205必须和基础细胞培养基一起使用（比如IMDM, DMEM-F12或其它基础培养基）。
--无需对XerumFreeTM XF205或加了XerumFreeTM后的培养基过滤处理。
--如果需要，先滤灭培养基，然后在无菌条件下添加XerumFreeTM XF205到滤灭的培养基中。
--相比于血清， XF205是5倍浓缩液，因此使用同等的量的话（比如2% XF205替代10% FBS）。
--XF205不含有生长因子如细胞因子，激素等，因此也不含有胰岛素。
1 制备
1.1 无血清细胞培养基的普通制备方法
使用之前轻轻地、短暂地摇晃XerumFreeTM瓶。
添加5倍浓缩的XerumFreeTM到你的基础培养基中（如10% FBS相当于2% XF205）。
不要滤灭XerumFreeTM或不要滤灭添加完XerumFreeTM后的培养基（XF 205是无菌的）。
如果培养基需要滤灭，则需在添加XF之前滤灭。
在这个阶段不要添加抗生素，实际上，抗生素像其它许多化合物一样会结合到血清的浆蛋白上，尤其是结合到白蛋白片段上。因此在无血清和白蛋白条件下同样浓度的抗生素将显示出较高的生物活性，且这种增加的活性对细胞生长可能产生有害的影响。
以防无抗生素培养不可行，建议添加50mg/L的庆大霉素到培养基中。
*一些使用者喜欢或需要在无胰岛素条件下培养细胞，如果您使用XerumFreeTM培养细胞，您可以选择添加或不添加胰岛素或其它的生长因子来培养细胞。如果需要添加胰岛素促进细胞增殖或性能研究，我们建议添加终浓度为1.25mg/L重组胰岛素到细胞培养基中。
1.2 过渡到无血清环境中的常规方法
通常有两种方法使细胞过渡到无血清环境下生长。
1.2.1 直接过渡
直接把细胞从含有血清的培养基转换到无血清培养基中。
1.2.2 逐渐适应法
按照以下步骤逐步地把细胞从含有血清的培养基中过渡到无血清培养基中，每一步把含有血清的培养基减半，因此按照下面的比例值来添加无血清培养基：
阶段1：50% XerumFree-supplemented 培养基 / 50% Serum-supplemented 培养基
阶段2：75% XerumFree-supplemented 培养基 / 25% Serum-supplemented 培养基
阶段3：87.5% XerumFree-supplemented 培养基 / 12.5% Serum-supplemented 培养基
阶段4：93.75% XerumFree-supplemented 培养基 / 6.25% Serum-supplemented 培养基
阶段5：96.88% XerumFree-supplemented 培养基 / 3.12% Serum-supplemented 培养基
阶段6：98.44% XerumFree-supplemented 培养基 / 1.56% Serum-supplemented 培养基
阶段7：100% XerumFree-supplemented 培养基
按照以上步骤如果细胞生长不好，则返回一步，细胞生长恢复正常再继续下面的阶段。
细胞培养物可能由不同的细胞系构成（贴壁细胞或悬浮细胞）或原代细胞培养物。然而，从功能角度来看，干细胞制备过程中细胞类型可能分化为不同的程度或显示出未分化特性。在不同情况下，为了保证我们培养的细胞获得最大的成功，我们要考虑到不同的细胞类型有不同的要求，需要不同的过渡方法。
基于此原因我们把过渡程序分为三部分，对应于三种细胞分别为：
2.1 –细胞系
2.2 –干细胞
2.3 –原代细胞
2.1 细胞系
以下操作流程对于常规（二倍体细胞，有限细胞系）或转化的或永生细胞系（无限细胞系）是有效的。
2.1.1 贴壁依赖性细胞系
关键成功因素：
--理想的细胞贴壁包被物
--最小化胰蛋白酶作用
--抗生素体系的选择
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