HPLC法测定鲜切富士苹果中多酚类物质
方案优势
高效液相色谱法(HPLC)是利用不同物质在流动相 和固定相中的选择性分配实现对目标物的分离, 重复 性好、操作方便, 是现如今运用最广泛的用于多酚类物 质检测的方法。
采用标准
方法/原理/步骤
苹果的鲜切加工
红富士苹果经自来水清洗后,在灭菌砧板上用灭菌的削皮刀削皮去除果核,切割成约1 cm×1 cm×1cm的小块备用。
鲜切苹果多酚的提取
提取溶剂为80%乙醇,料液比为1:6,均质后置于棕色瓶中,常温超声波提取30 min, 4℃12000r/min离心20 min,取上清液采用4.5μm滤膜过滤后进行液相分析。
标准工作曲线的建立
准确配制5个阶梯浓度的10种多酚物质的标准溶液,过0.45μm膜,按上述确定的色谱条件测定,以峰面积Y为纵坐标,质量浓度X为横坐标,绘制10条多酚标准曲线。
色谱稳定性检验结果
标样浓度为100 mg/L时,日内连续6次进样,保留时间的相对标准偏差(RSD)为0.89%,峰面积(Peak area)的RSD为2.23%;日间连续6 d进样,保留时间的RSD为1.29%,峰面积的RSD为2.51%。说明色谱工作性能稳定,测定结果可靠。
多酚回收率测定
向苹果多酚中定量添加已知浓度的不同标准样品,浓度分别为10μg/mL和50μg/mL。按照2.2.2样的方法制备测定多酚含量,根据测得样品中10种多酚含量来计算出相应的回收率。
10种多酚标准品液相色谱图
仪器设备
仪器：高效液相色谱仪(LC-2010HT),日本岛津公司;超速冷冻离心机(X-30R),美国贝克曼公司;超纯水器(Class UF),美国ELGA威立雅公司;旋转蒸发仪(IKA RV10),德国IKA公司;超声波清洗机(JRC-400),山东济宁润通超声电子有限公司。
仪器色谱条件：
采用Hypersil BDS C18色谱柱(4.6 mm×25 cm):检测波长为280 nm和320 nm时,流动相为甲醇和乙酸,流速: 1 mL/min,进样量: 20μL。检测波长为254nm时,流动相为乙腈和磷酸二氢钾水溶液(pH为3.0),流速: 0.8 mL/min,进样量: 20μL。
洗脱条件(320 nm和280 nm):流动相:流动相A:甲醇,流动相B:水:乙酸(V:V=99:1)。洗脱程序:0～32 min, B为90%; 32～40 min, B为90%～70%;40～50 min, B为70%～10%; 50～51 min, B为10%～90%; 51~65 min, B为90%。
