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切刻内切酶(NEAR)恒温扩增

2021.5.12

  切刻内切酶(NEAR)恒温扩增是目前相关研究最少的一种恒温核酸扩增技术。它是在2008年由Ionian科技公司的研究人员开发并申请ZL的(Brain等2009)。除了链置换酶(Bst)外,NEAR反应中还需添加一个切刻内切酶。NEAR反应的引物设计需要将所使用的切刻内切酶的DNA作为序列加在引物的5' 端。NEAR反应可以分为两步,第一步,Bst和模板DNA进行反应生成含有切刻内切酶识别序列的少量DNA。这些DNA在第二步作为模板,切刻内切酶先将单链切断,Bst在进行新链合成。基本上在5-10分钟就可以形成大量新合成DNA可以进行检测。NEAR产物的检测基本上和PCR一样。可以使用SYBR Green,可以使用荧光探针,也可以使用分子探针(molecular beacon)。目前Alere是唯一一家使用NEAR技术开发人类疾病诊断试剂盒及仪器的公司。Alere的Influenza A和B的检测试剂盒基本上在13分钟内可以完成检测。另一个关于StrepA的检测试剂盒基本上在8分钟可以完成对病原菌的检测。这是关于Flu和StrepA最快的分子的检测试剂盒。

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