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总糖含量的测定实验

2020.8.17

实验方法原理 苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸(或甲苯衍生物)起显色反应,己糖在490 nm处(戊糖及糖醛酸在480 nm)有最大吸收,吸收值与糖含量呈线性关系。


实验材料 葡萄糖


试剂、试剂盒 浓硫酸 苯酚


仪器、耗材 试管 试管架 移液管 量筒 烧杯 离心管 玻璃碾磨器 离心机 分光光度计


实验步骤


1. 材料的处理:将0.5~1 g所测的材料捣碎,用适量蒸馏水、玻璃碾磨器碾磨并分次抽提,混合液离心得抽提液即样品液。

 

2. 标准曲线制作:取50 μg/ml的己糖标准溶液0 ml,0.1 ml,0.2 ml,0.3 ml,0.4 ml,0.5 ml于试管中,用水补足到0.5 ml,加0.3 ml 5%酚溶液,混匀后快速加入1.8 ml浓硫酸,振荡混匀,室温放置20  min即可出现橙黄色,以第一管调零点,可于490 nm处比色测定读OD 值。以糖含量为横坐标,相应的 OD 值为纵坐标,绘制标准曲线。


3. 样品含量测定:取0.5 ml内含2~25μg糖量,同样加入0.3 ml 5%酚溶液,混匀后立刻沿管壁加入浓硫酸1.8  ml,振荡混匀,达室温后,可测490 nm处的 OD 值,从标准曲线上查相应糖含量。

 

注意事项


1. 几种己糖测定方法中所使用的显色剂,如蒽酮、间苯二酚等,都需要沸水浴加热,而本法不需要,且蛋白质的存在对本法的显色反应影响不大,故也可用于糖蛋白中的己糖测定。除此之外,还可用于己糖甲基化衍生物和6-脱氧核糖、戊糖的测定。

 

2. 本法的热量来自浓硫酸与水的混合,因此加浓硫酸时反应快,且立即混匀,试管应大一些,以免烫手。


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