应用LCQ 离子阱质谱仪和Mass Frontier 软件分析药物...（三）
图 7：与预测生成的碎片离子匹配后得到的实验二级质谱图（a）氯羟基杂质（b）二氯杂质和（c）二氢杂质，与Mass Frontier 软件预测匹配的实验碎片离子用红色标记
图7 为与预测的碎片离子相比较后的三个杂质的实验二级质谱图。Mass Frontier 的预测是基于图3 中三个杂质推断的结构给出的。和图6 一样，如预测的碎片离子和实验二级质谱中的离子匹配用红色标记。可以看到，实验得到的二级质谱的所有主要离子都被红色标记，这有力支持了所推断结构的有效性。表1 汇总了Mass Frontier 软件预测碎片结构和实验二级质谱的相关性结果，来验证图3 推断的杂质结构。为了理解如何获得到这样的结果，必须意识到除了取代发生的位置（图1 和图3 红色标识），所提议的药物中间体结构和三个杂质结构是相似的。因此，如果实验得到的四个化合物的二级质谱中，每个化合物都有特定的碎片离子，而Mass Frontier 预测能给出相同的裂解机理，那么所提议的三个杂质结构就是正确的：
● 如果Mass Frontier 软件预测碎裂机理生成的碎片结构不包含取代位，那么在实验得到的四个二级质谱图中应有相同质荷比的碎片离子。
● 如果Mass Frontier 软件预测碎裂机理生成的碎片结构包含了取代位（即如果实验得到的二级质谱图中药物中间体的碎片离子的质荷比为M，那么在二氢，氯羟基，二氯取代杂质分别应该有M+2, M+52 和M+70 质荷比值），那么碎片离子的质荷比应存在取代基质量数的差异。
在表1，Mass Frontier 软件指定具有相同裂解机理的碎片离子被以相同颜色加重。这样可以从表中看出，在所有情况下，由Mass Frontier 预测形成机理得到的有关联的碎片离子要么有相同的实验质荷比，要么有与取代基差异的实验质荷比，这依赖于Mass Frontier 预测的碎片结构是否有取代位。通过观察证明了所推断的杂质结构的有效性。
表1. Mass Frontier 软件结构预测汇总
结论
在数据相关二级质谱模式和动态排除的支持下，检测和表征了含量在0.1％或以下的ZL药物中间体的三个杂质。同位素分布和质量差说明了推断结构的合理性，并由Mass Frontier 所验证。通过Mass Frontier 预测碎片离子和实验得到的二级质谱图离子的比较，确定了所建议的三个杂质结构。该分析支持以下的结论：三个杂质都来自于药物中间体某双键位置的化学取代。
● 所要分析的杂质含量是母体成分丰度的0.1％以下，这是法规所要求的。Finnigan LCQ 离子阱质谱仪具有高灵敏度和高选择性，数据相关扫描模式，是成功完成杂质分析的必备工具。
● Mass Frontier 谱图管理和碎裂机理模块技术能够快速方便地完成结构分析，并能对推断的杂质结构予以确认。
