Mass Frontier碎片离子检索功能（FISh）在士的宁...（二）
3.3士的宁完整裂解机理
LTQ Orbitrap XL的线性离子阱相比传统三维离子阱具有更高的离子容量，故具有优异的多级质谱能力，能够高效的捕获前级离子进行碎裂，并获得高灵敏度的碎片离子信息，在对士的宁母离子的采集过程中，获得了其四级有效质谱信息（MS4）。通过多级质谱解析，总结出士的宁完整裂解机理，为未知代谢物检索带来有价值的信息（图3）。
图3. 士的宁MS4离子树及完整裂解机理
3.4 碎片离子检索（Fragment Ion Search, FISh）工作流程
碎片离子检索功能利用母药和代谢物的结构相关性，采用母药的特征质谱碎片，结合代谢途径，完成对未知代谢物的检索。利用该功能，在完成了士的宁母药的质谱裂解规律后，将特征碎片导入FISh模块中，并选择可能的代谢途径，结合代表性组分查找，检索士的宁未知代谢物的全面信息（图4）。
图4.碎片离子检索士的宁未知代谢物工作流程
3.5 碎片离子检索（Fragment Ion Search, FISh）结果
通过碎片离子检索获得准确全面的未知代谢物信息，包含未知代谢物色谱信息、一级多级质谱数据、未知代谢物代谢途径等信息，同时FISh 解释功能还可以通过母药及代谢物多级质谱信息之间的比对，进一步对代谢位点进行推测（图5）。
图5.士的宁未知代谢物检索鉴定结果
以RT 11.5 min的未知代谢物为例，通过FISh计算，获知该未知代谢物为羟基化代谢产物，通过FISh解释功能比对264.1、280.0、323.1、334.2、238.0 m/z等特征碎片，推测出该代谢物为16-Hydroxystrychnine（图6）。
图6.士的宁代谢物16-Hydroxystrychnine
使用相同处理方法，共检测到士的宁26个代谢产物，其中一相代谢产物22个，二相代谢产物4个，见表1。
表1. 士的宁代谢产物鉴定结果
4. 小结：
4.1 Thermo LTQ Orbitrap XL质谱仪将线性离子阱与高分辨静电场轨道阱Orbitrap 检测技术相结合，提供优异的性能和出色的多功能性。线性离子阱更高的离子容量能够高效的捕获前级离子进行多级碎裂，获得高质量的多级质谱图，本实验通过线性离子阱逐级裂解剖析了士的宁完整裂解机理。Orbitrap技术具备高分辨高质量精度（HR/AM）的能力，本实验中士的宁代谢产物质量偏差<3 ppm，能够有效的排除干扰，获得代谢物准确的元素组成。
4.2 Mass Frontier为Thermo专业的结构解析软件，利用其丰富的碎裂数据库（Fragmentation Library），可快速的对士的宁多级碎片结构进行了准确推测和归属，在快速解析碎片的同时，可获得完整的碎片裂解途径，并可方便的调用查看所引用的文献情况，保证了碎片解析的准确性。母药和代谢物存在结构相关性，质谱多级碎裂后可能生成共有碎片，碎片离子检索（FISh）功能将这种相关性与可能的代谢途径有机的结合起来，从繁杂的基质样品质谱信号中准确的筛选到未知代谢物信息，通过比对母药和代谢物多级质谱信息， FISh解释功能更可进一步对代谢位点进行推测。
