饲料中金霉素的检测
方案优势
饲料中金霉素含量测定，目前常用的测定方法有高效液相色谱法(HPLC)和微生物法。微生物法较为经典、成本低，但受一些有抗菌活性杂质影响，金霉素含量不一定准确。高效液相色谱法灵敏度高、专属性强，能够更好地控制四环素、差向金霉素等杂质的含量。
采用标准
GB/T19684-2005《饲料中金霉素的测定高效液相色谱法》
方法/原理/步骤
色谱条件
色谱柱：Hitachi LaChrom C18(5μm) 4.6mmI.D.x250mmL
柱温：25℃
流速：1.0 mL/min
检测波长：375nm
进样量：20μL
流动相：0.01M草酸水溶液：乙腈:甲醇=77：18：5
溶液制备
准确称取一定量金霉素标样于10ml容量瓶，用甲醇溶解并定容，作为贮备液；然后稀释得到浓度为10μg/ml的标准品溶液，用0.45μm滤膜过滤，进样测定。
准确称取10g饲料样品于250mL具塞锥形瓶中，准确加入100ml 0.05mol/L盐酸溶液，超声提取10min后静置，取上清液于离心管中，10000转/分钟离心5min，用0.45μm滤膜过滤，进样测定。
仪器设备
仪器
1)四元梯度泵PM1110
2)自动进样器PM1210
3)柱温箱PM1310
4)紫外检测器PM1410
5) PM色谱工作站。
实验结果
1、标样测定
根据GB/T19684-2005的色谱条件，调节乙腈、甲醇和草酸溶液的比例，在草酸水溶液：乙腈:甲醇=77 : 18 : 5的条件下，实际样品中金霉素和杂质峰的分离很好，因此选择该比例进行实验，出峰时间为9.66min，图1为金霉素标样的色谱图。
图1金霉素标样色谱图
2、检出限
对标准溶液逐级稀释，在信噪比S/N=3时得到金霉素的检出限为0.05μg/ml。
图2检出限色谱图
3、重复性实验
对金霉素标样溶液重复进样6次，6针峰面积的相对标准偏差为0.13%，重现性很好，结果见下表
表1金霉素标样6针峰面积的重现性
4、饲料样品检测
猪饲料经前处理后测定，在9.66min未检测到金霉素残留，实验结果见图3。
图3饲料样品与加标样品重叠色谱图
结论
采用日立Primaide高效液相色谱仪四元梯度配紫外检测器，准确地测定了金霉素的含量，在上述色谱条件下和杂质得到很好的分离，重现性良好，最低检测限可达到0.05μg/ml；对饲料样品中该项目进行了检测，未检出金霉素残留，方法简便实用，紫外检测器灵敏度高，适用于常规限量检测。
