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使用饲细胞(Feeder Cells)制备

2020.9.14

(1)取原代培养的人或动物胚胎成纤维细胞,90%汇合时制成细胞悬液,再按105细胞/毫升重新接种培养。

(2)在细胞半汇合时,准备0.25μg/ml的丝裂霉素C,按2μg/106细胞的量加入到培养瓶中过夜;或用射线单次照射,剂量30~50戈瑞。


(3)细胞经上述处理后,Hanks液漂洗两次、更换培养液、再培养24小时,胰蛋白酶消化细胞制成悬液,按5×104(104细胞/cm2)接种入新培养基中。

(4)48小时后,即可用于细胞克隆之用。

制备浓度为1 mg/ml的多聚右旋赖氨酸的水溶液,用以湿润培养瓶底。倒出多聚赖氨酸溶液,用5ml PBS冲洗一次后,可立即使用,或存数周内使用。


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