线性离子阱多种解离技术对阿德福韦酯杂质谱的全（二）
结果与讨论
I. 全扫—Top5 HCD dd MS/MS 与“FISh”
ADP 杂质谱分析流程由两次连续的LCMS实验构成。分析目标是为杂质鉴定和结构解析收集尽可能多的信息。第一个 MS 实验包括全扫描和后续的 Top5 HCD 数据依赖MS/MS 扫描（图1）。 接下来，数据通过MassFrontier 当中的Fragment Ion Search（碎片离子检索，FISh）算法进行处理，这是一个新颖的进行杂质检出及鉴定的方法，主要基于母离子解离模式的比较（图2a，b）。与母药拥有相同碎片的成分会被“FISh”识别出来，见图3。
图1.阿德福韦酯的质谱总离子流图
图2. 用Mass Frontier“FISh”算法检测出杂质成分
标注：FISh 检测到的成分
图3. “FISh”算法检测出的杂质成分的XIC
II.Trap-HCD/CID MS2 和MS3 为未知化合物的结构解析提供丰富的碎片信息
进一步的结构信息通过结合母化合物列表、使用Trap-HCD 和CID 解离组合进行MS2 实验获得。
当归一化的碰撞能量水平相同时，Trap-HCD 比 CID 生成的碎片谱图信息更丰富。Trap-HCD 没有低质量数歧视效应，见图4。CID MSn 能够提供步进的裂解信息，对结构解析非常有价值，见图5，6。
图4. 阿德福韦酯在相同的 25%NCE水平下的CID & HCD MS2 谱图
- 全扫，CID dd MS2（设定母离子列表），然后对前三的MS2碎片离子进行 HCD MS3
- 全扫, CID dd MS2 （设定母离子列表），然后对前三的MS2碎片离子进行 CID MS3
- 全扫, HCD dd MS2 （设定母离子列表），然后对前三的MS2碎片离子进行 CID MS3
- 全扫, HCD dd MS2 （设定母离子列表），然后对前三的MS2碎片离子进行 HCD MS3
图5. 杂质m/z 558.19的CID与HCD谱图比对
