免疫分析技术测定农残的原理
基本原理
常用于农药残留分析的免疫分析的技术有放射免疫分析(radioimmunoassay,RA)和酶免疫分析(enzyme immunoassay,EA)两种。RIA创立于20世纪60年代,EIA是继RIA之后,于20世纪70年代发展起来的一项新的免疫学技术。RIA与EIA技术一样,由反应系统和检测系统组成。在免疫反应系统中,RIA与EIA技术的原理基本一致,即抗原与抗体反应,形成抗原抗体复合物。但在检测系统中,二者有本质的区别。RIA技术以放射性同位素(如251,32P,3H等)作指示剂(标记物),然后用γ射线探测仪或闪烁计数器测定γ射线或β射线的放射强度。
而在EIA技术中,用作标记物的指示剂为生物酶。酶是一种高效的生物催化剂,可与其底物发生特异性催化反应。生成的产物又可与另一种能产生颜色反应(生色源)或使紫外吸光值变化(供氢体)的化合物发生氧化还原反应。最后,用分光光度计测定底物液的吸光值,便可检测指示剂的变化情况。
RIA技术操作过程中检测放射性同位素需要昂贵的仪器设备和防辐射设备,并且需要专业人员,尽管RIA技术的灵敏度目前已达pg/mL水平,但它的应用前景受到限制。相对于RIA技术而言,EA技术有更多的优点,如灵敏度高、特异性强、成本低、便快速、自动化程度高、检测方法多样和安全等。因此,EIA技术,尤其是酶联免疫吸附分析技术(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),已成为目前使用最普及的免疫分析技术。下面主要介绍酶免疫分析ELISA分析方法。
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