小鼠骨髓间充质干细胞的原代取材
实验概要
小鼠骨髓间充质干细胞的原代取材
主要试剂
75%酒精、含2% SP（Pen Strep）的DPBS、间充质干细胞培养液
主要设备
眼科剪、眼科镊、手术剪、手术镊、5 mL注射器、10 mL注射器、7号针头、400目细胞筛、15 mL离心管、3.5 cm培养皿
实验步骤
①断颈法处死小鼠，用手术器械完整地取下小鼠后腿的胫骨和股骨，放在75 %的酒精中浸泡 5min。
②用手术器械剔除骨膜以及肌肉等组织，然后将胫骨和股骨在含有2% SP的DPBS中洗两遍。
③将胫骨或股骨的两端软骨剔除，用消毒针头在骨的一端穿一个小孔，用吸有间充质干细胞培养液的5 mL注射器（7号针头）冲出骨髓（可反复冲两遍），过400目细胞筛，制成单细胞悬液。
④将所得的细胞悬液移入一个15 mL离心管中，室温1 000 r/min离心10 min，弃掉上清液。
⑤用间充质干细胞培养液重悬细胞，按每3.5 cm培养皿2×106个细胞的密度接种，标记为原代细胞（P0）。
⑥置于37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养。
⑦24h后更换新鲜的间充质干细胞培养液，去除未贴壁细胞。以后每2～3天更换1次培养液。
⑧待细胞长至80%～90%融合时传代。
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