紫外光谱分析法测定酪氨酸的含量
紫外光谱分析法测定酪氨酸的含量
一、 实验目的
1、掌握紫外可见分光光度计的工作原理和操作方法；
2、用紫外可见分光光度计进行定性及定量分析。
二、 实验原理
紫外可见分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似，利用一定频率的紫外－－可见光照射被分析的有机物质，引起分子中价电子的跃迁，它将有选择地被吸收。一组吸收随波长而变化的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。
三、 应用范围
紫外可见分光光度分析在有机化学、无机化学、生物、医药、材料、冶金、地质等领域有广泛的应用。可以鉴定分子结构比较复杂的有机物质，测定微量物质的含量，研究物质的分子结构和反应的历程，立体结构的确定等。工业方面的专门用途包括水分析、食品和饮料分析、DNA和RNA分析、生命科学、分子生物相关的方法以及反射能力测量等。在药品研究中，可以定量分析留体、维生素、抗菌素、生物碱、黄酮类等。可进行时间扫描。
四、 仪器和试剂
仪器：U-3010紫外可见分光光度计；比色管（10ml；25ml）；容量瓶（250ml；50ml）；移液管（10ml；5ml）；滴管；烧杯（500ml；50ml）；玻璃棒；试管架
试剂：（1）10-3 mol/L酪氨酸储备液：准确称取45.30mgL-酪氨酸,加50 ml二次水溶解，用二次水定容至250ml。
（2）二次水
五、 实验步骤
1.系列标准溶液的配制 取5只10 ml比色管，用10-3 mol/L酪氨酸储备液配制浓度分别为10-4，2×10-4，3×10-4，4×10-4，6×10-4mol/L标准溶液。
2.绘制标准曲线 用紫外可见分光光度计扫描待测酪氨酸溶液，找出酪氨酸的最大吸收峰。将波长固定在最大吸收峰处，测定系列标准溶液的吸光度。
3.未知溶液的测定 在标准系列溶液同样条件下，测量未知溶液的吸光度。
六、 数据处理
以吸光度为纵坐标，以酪氨酸溶液的浓度为横坐标作标准曲线。根据未知溶
液的吸光度可在标准曲线上确定未知液中酪氨酸的浓度。
附一：U-3010紫外可见分光光度计
一．仪器光路示意图
二．操作方法
1）系统开机准备
1. 接通电源，启动微机
2. 打开光谱仪主机电源
3. 预热15分钟
2）操作步骤
1. 运行UV Solution软件
2. 设定检测方法和测量参数
3. 输入样品名称、注释及操作者姓名
4. 将空白样品分别放入参比池和样品池，校准用户基线
5. 将样品放入样品池,开始测量
6. 打开数据处理页面，进行数据处理
7. 保存数据
8. 检测下一个样品
3）系统关机清理
1. 退出UV Solution软件
2. 关闭光谱仪主机电源
3. 关闭计算机
4. 抽下电源插座，切断电源
5. 作好仪器使用记录，清理实验台
