用非同位素探针进行原位杂交和检测实验——杂交信号放大
| 实验材料 | |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 1〜3μg ml生物素酰化抗亲和素抗体 溶于4×SSC 1% (m V) BSA (组分 V)生物素信号放大溶液：含2〜5μg ml荧光素亲和素DCS 溶于 4×SSC 1% (m V) BSA (组分V) |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 1) 用生物素酰化探针与切片进行杂交、洗涤，进行第一轮杂交信号检测。 对生物素酰化探针信号的放大，可在基本方案步骤8之后的任何一步进行。 2) 如果切片已加盖玻片并密封，可用一针头或解剖刀片划开密封的指甲油，移去盖玻片，并除去载玻片上指甲油。将玻片浸于盛有 0.1% Triton ×-100/4×SSC的，以铝箔包裹的Coplin广口瓶15 min,轻轻摇动。如盖玻片不易松动，应小心抬起，重复洗涤2次。 3) 吸去载玻片上残余溶液，在载玻片上加 50μL的1〜3μg/ml生物素酰化抗亲和素抗体，盖以22 mm2大小的Parafilm 膜，置加湿盒中，湿盒外裹以铝箔，放 37℃温育 30 min。 4) 取掉Parafilm 膜，在 0.1% Triton ×-100/4 × SSC中轻摇洗涤15 min。 5) 吸去玻片上残液，加50μL生物素信号放大溶液，盖以Parafilm膜。放在裹以铝箔的加湿盒中，于37℃温育30 min。 6) 移去Parafilm 膜，并以 0.1% Triton×-100/4×SSC 洗涤 15 min。然后以 4×SSC洗涤15 min,洗涤时应轻轻摇动。可进行亲和素-荧光素和生物素酰化抗亲和素抗体的多层反应，但将会明显地增加本底。 7) 复染，固定并在显微镜下观察 展开 |
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