分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

苯妥英钠的血药浓度测定及中毒反应观察

2019.4.22

实验概要

观察苯妥英钠的毒性反应，对药物血药浓度监测有初步的认识。

实验原理

苯妥英钠治疗有效浓度为10-20mg/L，血药浓度大于20 mg/L出现眼球震颤，大于30 mg/L致共济失调等小脑前庭系统功能障碍，大于40mg/L可引起精神改变。测定苯妥英钠可用光谱法、HPLC及免疫化学法，较成熟的是衍生化后紫外检测法。其原理是将标本调节至pH6.8后，以二氯甲烷提取及沉淀蛋白，再转溶于NaOH溶液，加KMnO₄再加热，使苯妥英氧化为吸光值大的二苯酮衍生物，再以环已烷提取，247nm紫外光比色定量。本法灵敏度、线性范围、重复性均可满足TDM要求。

主要试剂

药品
20mg/ml苯妥英钠溶液

7mol/L氢氧化钠溶液

pH6.8磷酸盐缓冲液

3%戊巴比妥钠溶液

饱和KMnO₄溶液

二氯甲烷

环己烷

主要设备

可调微量加样器
5ml注射器
具塞离心试管
水浴锅

实验材料

动物：大鼠

实验步骤

1. 选择230-250g健康大鼠1只称重，腹腔注射苯妥英钠(120mg/kg),密切观察2小时内大鼠反应,并在给药后0、10、30、50、70、90、120min自颈静脉窦采血1ml，离心5min（2500rpm）取血清待测。

2. 紫外法测血药浓度取大鼠血清0.3ml，再分别加入pH6.8磷酸盐缓冲液0.3ml，混匀后用二氯甲烷5ml提取，离心15min（2500rpm），弃去上层，取下层二氯甲烷于另一具塞离心试管中，加入7mol/LNaOH3.0ml，混合均匀，离心15min（2500rpm），取上层碱液于另一10ml具塞离心试管中，置70℃水浴约5min除去二氯甲烷，加入饱和高锰酸钾溶液3.0ml，混匀，置80℃水浴加热20min，冷却至室温。加入环己烷3.0ml，混匀，离心15min（2500rpm），取上层，以环己烷为空白对照，在247nm波长处测其吸收度(A)。将吸光度值代入标准曲线方程，得到苯妥英纳的血药浓度。

3．标准液的配制精密称定干燥至恒重的苯妥英钠标准品0.025g，加新沸过放冷的蒸馏水定容至25ml，作为标准品溶液备用。

4．标准曲线的制备取10ml具塞离心试管6只，按顺序加入大鼠空白血清0.3ml和0、3、6、12、24、48μl新配的标准品储备液，混匀，再分别加入pH6.8磷酸盐缓冲液0.3ml，混匀后用二氯甲烷5ml提取，离心15min（2500rpm），弃去上层，取下层二氯甲烷于另一具塞离心试管中，加入7mol/LNaOH3.0ml，混合均匀，离心15min（2500rpm），取上层碱液于另一10ml具塞离心试管中，置70℃水浴约5min除去二氯甲烷，加入饱和高锰酸钾溶液3ml，混匀，置80℃水浴加热20min，冷却至室温。加入环己烷3.0ml，混匀，离心15min（2500rpm），取上层，以环己烷为空白对照，在247nm波长处测其吸收度 (A)。以A对药物浓度C回归，求标准曲线方程。

注意事项

1. 制备标准曲线时要操作规范，回归系数要达到0.999以上。

2. 实验中取上层氢氧化纳时应尽量少混入二氯化碳，70℃水浴时要防止二氯化碳沸腾时溅出氢氧化纳增大实验误差。

3. 二氯化碳应尽量除去完全，加入高锰酸钾氧化时具塞试管应密封，防止氧化产物二苯酮挥发，避免使测得值偏低。

苯妥英钠

Everlab云端实验室

喜欢作者我要约稿