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高效的单细胞打印技术加速稳定细胞系的开发

2021.2.23

目前,在单抗制药领域,需要稳定高产的细胞株,用于下游的抗体稳定生产,因为稳定高产的细胞株不仅可以简化下游纯化工艺,还可以降低整个生产工艺的成本,确保高品质产品的获得,以应对复杂的临床应用和市场竞争环境。



Fig.1 细胞株构建经典流程


传统的细胞系开发的单细胞分离技术存在很多缺陷,如分离效率低,细胞存活率低等。由德国cytena公司开发的ZL的单细胞打印技术(SCP technology),通过将单个细胞自动分离到标准的96孔板/384孔板中,大大加速抗体细胞株的开发且适用于各种细胞类型。

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Fig.2 SCP


自推广以来,SCP单细胞打印机不负众望,深受广大客户的喜爱,获得一致好评,全国范围内的demo预约也是络绎不绝,诸如药明康德、信达生物、君实生物、齐鲁制药、昭衍生物、迈百瑞、杭州养生堂、丽珠生物、复宏汉霖、宜明昂科、泽璟生物、皓阳生物和三优生物等几十家中国知名制药企业在demo成功后都纷纷购买设备。在艾贝泰和客户的努力下,有的制药企业仅一个月时间便实现了仪器从demo试用到设备安装,从培训到最终投入使用,大大缩短了细胞株开发的时间。


应用案例展示
 

SCP和有限稀释(LD)分选单细胞的效率对比
 

为了评估SCP分选单细胞的效率,我们在用SCP分选细胞后,在day0天统计了单细胞的比例,并连续跟踪细胞的生长,在14天时分析了单细胞生长起来的克隆率。
 

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Fig.3 比较SCP与LD的单细胞接种效率


为了避免周边孔的蒸发影响细胞的生长,我们只分选了96孔的中间60个孔。如图3所示,SCP实现了高效的单细胞接种效率。两个细胞和零个细胞发生的比例非常低。每块 96 孔板的平均分选时间为3-5分钟。经SCP分选的每块孔板中单细胞率和单克隆生长孔数显著优于有限稀释法。不管是单细胞率还是克隆生长率,SCP都是LCD的 3-4 倍,这意味着有更多的单克隆用于后续的高产细胞株筛选。


克隆成活率
 

在同样的细胞株和培养基条件下,我们比较了SCP和LD的单细胞克隆成活率。
 

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Fig.4 比较SCP与LD的单克隆孔数


左上图为经SCP分选一块96孔板在第 14 天的克隆团图像,一共有70个单细胞克隆孔。相对地,右上图为LD处理的微孔板,其中有27个孔生长出克隆团,有7个孔中含有明显的两个细胞团,只有20个孔是单细胞克隆孔。计算每个孔内的克隆数目并分成 3 类:空孔,单个克隆的孔以及多个克隆的孔。我们观察到SCP可以产生 73.7% 的单克隆孔(另外有 0% 的孔含多个克隆,26.3%的孔没有克隆)。同时,我们发现LD可以获得20%的单克隆孔(另外 70.5% 的孔没有克隆,9.5%的孔含多个克隆)。
 

类似的案例还有很多,就不在此一一列举。大家一致好评的是单细胞打印机分选快速,操作简单,单克隆生长率是手动分离的3-4倍。
 



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