英科新创乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全...-2
2 ． 4 用乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全血金标试纸条检测两种不同厂家 ELISA-TP 、 H B sAg 均阴性的 60 份血样，结果均为阴性反应。
2 ． 5 用乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全血金标试纸条对单一 H B sAg 阳性血样和单一梅毒阳性血样 1 ： 1 混合的 30 份血样检测，结果试纸条上均在相应的检测线上出现出现两条阳性反应检测线。
2 ． 6 用乙型肝炎病毒表面抗原全血金标试纸条对单一 H B sAg 阳性血样和单一梅毒阳性血样 1 ： 1 混合的 30 份血样检测，结果试纸条上在相应的检测线上出现出现一条阳性反应检测线。
2 ． 7 用乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全血金标试纸条随机对 100 份无偿献血者血液进行初筛，筛查出 4 例乙型肝炎病毒表面抗原阳性， 2 例 / 梅毒螺旋体阳性。 100 份血样再用 TP-ELISA 和 HBsAg -ELISA 检测结果一致。详细结果见附表
2 ． 8 用 TPPA 检测 107 份血样试验结果，弱阳性反应为 4 份；阴性为 14 份；阳性反应为 89 份；其中 26 、 42 、 49 号血样 TPPA 为阴性反应而乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全血金标试纸条检测为阳性反应； 100 号样本 TPPA 为弱阳性而试纸条为阴性反应。 107 份血样乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全血金标试纸条检测结果与 TPPA 检测结果符合率为 96.26% 。 TPPA 检测详细情况见图 7
图 7 TPPA 检测 107 份血样共计 5 块 U 形板
3 讨论
乙型病毒肝炎在我国广泛流行，人群中感染率大约为 10% 左右。近年来梅毒也出现流行趋势，梅毒已不在局限于高危人群，据本站无偿献血者的血液梅毒检测资料显示不同人群（干部、医护人员、工人、学生、服务人员等）均有梅毒阳性者，所以加强梅毒的筛查工作，对合理的开发血液资源，进一步降低血液的报废率，预防梅毒经输血传播都有着重大的现实意义。从我站 2001 年 ~2005 年 7 月对我市无偿献血者血液检测的结果可见，梅毒感染者逐年增加，特别是在对献血者梅毒筛选试剂由检测梅毒特异性抗体双抗原夹心 ELISA-TP 的方法代替非特异性 TRUST 梅毒抗体检测，梅毒的检测率大大的提高，已由原来的 0.2% 上升到 0.78% 。为了适应新形势下的无偿献血工作模式，所以血站建立经济又适用的快速筛查血液试剂是十分必要的。新创公司新研发的乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全血金标快速检测试纸条，为血站提供了一种新型的乙肝表面抗原和梅毒抗体联合检测的快速试剂，该试剂一次实验同时获得乙肝表面抗原和梅毒抗体两个实验结果，大大的节省人力物力，非常的适应对献血者血液快速检测。
快速诊断试纸条技术是 20 世纪九十年代以来在单克隆抗体技术、胶体金免疫层析技术和新材料技术基础上发展起来的一项新型体外诊断技术。近年来发展迅速，已在生物医学领域特别是医学检验中得到了广泛应用。 乙肝表面抗原和梅毒抗体联合检测快速金标试纸条的就是采用了这一技术的原理在硝酸纤维素膜上预包被金标抗 HBsAg 单抗（ Au-sAB1 ）和金标 - 特异性梅毒基因重组抗原，再在硝酸纤维素膜上的两条检测线和对照线上依次包被抗 HBsAg 单抗（ sAB2 ）、特异性梅毒基因重组抗原和 羊抗鼠 IgG ，分别作为 HBsAg 的检测、特异性梅毒抗体的检测线和对照线。当检测 HBsAg 阳性样本时，样本中的 HBsAg 与胶体金标记的抗 HBsAg 单抗（ sAB1 ）形成复合物，由于层析作用复合物沿着硝酸纤维膜层析至 HBsAg 检测线时，即与检测 线上预包被 的抗 HBsAg 单抗（ sAB2 ）结合形成“ Au-sAB1-HBsAg-sAB2 ”夹心物而凝集在 HBsAg 检测线上显色， 未结合 的胶体金颗粒则富集在对照线处，使对照线呈现清晰可辨的有色线条，如被测试是阴性样品时，仅只在对照线处显色。当检测梅毒抗体阳性样本时，样本中的梅毒抗体与胶体金标记的 TP 抗原特异性结合，形成复合物，复合物沿着硝酸纤维素膜层析至 TP 抗体检测线时，即与检测 线上预包被 的 TP 抗原结合形成“金颗粒 -TP- 抗原 -TP 抗体 -TP 抗原”夹心结合物，使 TP 抗体检测线呈现清晰可辨的有色线条。 未结合 的胶体金颗粒则富集在对照线上，使对照线呈现清晰可辨的有色线条。如被测试是阴性样品时只在对照线处显色。本检测 条结构 简单使用方便，检测时仅需要加 60 ml 血样即可，且判读时间为 5~20 分钟出结果，阳性和阴性结果清晰易判断。
从试验结果的表 1 和表 2 中可见乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全血金标试纸条试纸法对乙型肝炎病毒表面抗原检测的灵敏度、特异性、符合性分别是 80% 、 100% 、 90% ；对梅毒螺旋体的检测的灵敏度、特异性、符合性分别是 92% 、 100% 、 95% 。在对乙型肝炎病毒表面抗原血清盘检测中漏检的 3 份血清， HBsAg 含量均是小于 0.5 ng /ml 的弱阳性标本，所以该联合检测试纸条对乙型肝炎病毒表面抗原检测最低含量值已达到 1 — 2 ng/ml 。
从表 2 中试纸条在对梅毒血清盘的检测结果可见，试纸条检测漏检的 2 份血样均为弱阳性；再从表 3 中试纸条对 107 份血样检测结果与两种不同厂家 TP-ELISA 、 TPPA 的两种方法检测结果比较可见，在 TPPA 检测 107 份血样中呈阳性反应有 86 份，弱阳性反应有 5 份 , 在这些 TPPA 检测呈阳性反应的结果中试纸条仅有 1 份弱阳性未检测出，该样本的 TP-ELISA 检测 OD 值为（ 0.371-0.545 ） , 即试纸条与 TPPA 阳性检测符合率高达 98.90% ；在表 3 中还可见，在 ELISA-TP 检测结果 OD 值 0.200 左右的 11 份 (TPPA 阳性反应有 9 份 ) 血样中 , 试纸条均在 15 分钟内检测出来 , 这说明了试纸条检测梅毒的灵敏度已接近 ELISA 检测水平。
由于没有同时阳性的血样，为了测试乙肝表面抗原和梅毒抗体联合检测快速金标试纸条检测乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体抗体的能力，就随机各用 10 份单一乙型肝炎病毒表面抗原阳性和单一梅毒螺旋体抗体阳性血样进行 1 ： 1 的 混合来摸拟 乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体抗体均阳性的血样，试纸条检测结果均分别在试纸条上 TP 、 HbsAg 的检测线位置处出现红色反应线。
从试纸条对 60 份不同厂家的两种 ELISA- HBsAg 、 TP-ELISA 均为阴性反应，以及对 - HBsAg 、 TP 的血清盘、 107 份梅毒等的检测中均未出现假阳性反应现象来看，这证明了 HBsAg / TP 联合全血试纸条就有较高的特异性。
综上所述，乙型肝炎病毒表面抗原 / 梅毒螺旋体联合全血金标试纸法操作简单， 加样量 少，特异性强，灵敏度高，反应速度快，快速简便，一次实验就可得到乙肝 表面表面 抗原和梅毒抗体两个实验结果，比现生物免疫试剂市场上销售的单一检测乙肝表面抗原和梅毒抗体的金标试纸 条同时 用于对献血者血液筛选在经济成本上将大大降低，所以该 HBsAg / TP 联合全血金标 试纸条是目前 血站快速筛选 HBsAg 、 TP 最为理想的试剂。在无偿献血者中进行 HBsAg / TP 联合全血试纸条初筛检查，不仅可以大大的减少不和格血液的采集，降低血液报废率，避免血液资源和环境的污染，同时从血液安全角度出发，对梅毒的初筛可明显提高无偿献血的合格率，进一步的提高了血液质量，因为梅毒 主要以性传播 为主，梅毒的感染者有可能成为潜在的 HIV 病毒的传播者，因此，梅毒阳性的献血者仍然属于高危险行为的人，血液存在着传染疾病的危险，故对献血者的血液梅毒初筛检测是非常必要的，它即保护了献血者又确保了受血者的身体健康，因此在无偿献血者中使用 HBsAg / TP 联合全血试纸 条进行 血液的 HBsAg 、 TP 的筛查，具有广泛的社会效益和经济效益，同时对进一步深入、持久的开展无偿献血工作具有很好的应用价值。
