小麦粉中过氧化苯甲酰的测定（气相色谱法）

2019.9.21

　　一、目的

　　熟练掌握气相色谱操作技术。

　　二、原理

　　小麦粉中的过氧化苯甲酰被还原铁粉和盐酸反应产生的原子态氢还原，生成苯甲酸，经提取净化后用气相色谱仪测定，然后与标准系列比较定量。

　　三、试剂

　　1.乙醚、丙酮、石油醚(沸程60-90℃)

　　2.盐酸(1＋1)溶液

　　3.50g/L氯化钠溶液

　　4.还原铁粉

　　5.10g/L碳酸钠的50g/L氯化钠水溶液：称取1g碳酸氢钠溶于100ml50g/L氯化钠溶液中。

　　6.石油醚：乙醚(3＋1)混合溶液

　　7.苯甲酸标准贮备液：准确称取苯甲酸(基准试剂)0.1000g，用丙酮溶解并转移至100ml容量瓶中后定容，此溶液浓度为1mg/ml。

　　8.苯甲酸标准使用液：准确吸取苯甲酸标准贮备溶液10.00ml于100ml容量瓶中，用丙酮稀释定容，此溶液浓度为100μg/ml。

　　四、仪器和用具

　　1.气相色谱仪，附有氢火焰离子化检测器。

　　2.微量注射器：10μl。

　　3.150ml具塞三角瓶 150m分液漏斗 50ml具塞比色管

　　五、操作方法

　　1.样品处理

　　准确称取试样5.00g置于具塞三角瓶中，加入0.01g还原铁粉，约20粒玻璃珠(φ6mm左右)和20ml乙醚，混合均匀。逐滴加入0.5ml盐酸，回旋摇动，用少量乙醚冲洗三角瓶内壁后放置过夜(至少12h)，摇匀，静置片刻，将上清液用快速滤纸滤入150ml分液漏斗中。用乙醚洗涤三角瓶内的残渣，每次用15ml(标准曲线溶液每次用10ml)，共洗涤三次。最后用少量乙醚冲洗过滤漏斗和滤纸，滤液合并于分液漏斗中。

　　取50g/L氯化钠溶液30ml倒入分液漏斗中，回旋摇动30S，防止气体顶塞，并适当放气。静止分层后弃去下层水溶液。再用氯化钠溶液重复洗涤一次，弃去下层水溶液。加入10g/L碳酸氢钠的50g/L氯化钠水溶液15ml，回旋摇动2min(切勿剧烈振荡，以免乳化，并适当放气)。静止分层后，将下层碱液放入50ml具塞比色管(预先放置3-4药勺固体氯化钠)中。分液漏斗中的醚层再用碱性溶液重复提取一次，合并下层溶液于比色管中。加入0.8ml(1＋1)盐酸溶液，适当摇动，充分驱除残留的乙醚和反应产生的CO2气体(若室温较低时可将比色管置于50℃水浴中加热)，至管内无乙醚的气味为止。再加入5.00ml石油醚-乙醚(3＋1)混合溶液，充分振摇1min后静止分层，弃去下层溶液。

　　2.绘制标准曲线

　　准确吸取苯甲酸标准使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0ml分别置于150ml具塞三角瓶中，除不加还原铁粉外，其它操作按1中“加入约20粒玻璃珠……弃去下层溶液”方法操作。其制备液的最终浓度分别为0、20、40、60、80、和100μg/ml。然后用微量注射器分别取不同浓度的苯甲酸溶液2.0μl注入气相色谱仪中。以其苯甲酸峰面积为纵坐标，苯甲酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。

　　3.测定

　　色谱条件：内径3mm、长2m的玻璃柱，填装涂布5%(m/m)DEGS＋1%磷酸固定液的(60-80目)Chromosorb W/AW DMCS。调节载气(氮气)流速，使苯甲酸于(5-10)min内出峰。柱温为180℃，检测器和进样口温度为250℃。不同型号仪器调整为最佳工作条件。

　　进样测定：用10μl微量注射器取2.0μl测定液，注入气相色谱仪中，取试样的苯甲酸峰面积与标准曲线比较定量。

　　4.结果计算

　　X＝×0.992　　(3-9)