墨汁吞噬实验
实验原理
血液中的中性粒细胞及单核细胞对细菌、异物等具有吞噬作用。在一定量的肝素抗凝血中,加入一定量的墨汁,经37℃温育4小时,涂片染色后,在显微镜下观察吞噬细胞对墨汁的吞噬情况,并计算吞噬率及吞噬指数,从而协助急性白血病的诊断与鉴别。
三、实验方法
材料:
1.肝素抗凝剂配成6U/ml水溶液。
2.模式制备普通砚台上加生理盐水5ml,以优质中国块墨或印度墨,以100r/min研磨3min。所得墨汁经普通滤纸过滤3次备用。
3.恒温孵育箱、显微镜等。
方法:
1.取小试管1支,加肝素20μl,加耳垂血或指血100μl于试管中混匀。
2.加入过滤墨汁10μl,混匀,加塞。
3.置37℃温育4小时,取出,推成血片,待干后,用瑞氏瑞氏镜检。
4.计数幼稚细胞或中性成熟粒细胞100个;计数单核细胞20个。计算吞噬率及吞噬指数。
四、实验结果计算
1.根据细胞吞噬墨粒多少及大小,可定为下列程度:
(阴性)细胞内未吞噬墨粒
(+)细胞内含有小墨粒1~5个
(++)细胞内含有大小不同墨粒10个左右
(+++)细胞内含有大墨粒10个左右,小墨粒较多
(++++)细胞内含有多数大颗墨粒,并有块状、球状,小墨粒很多,但细胞核清楚
2.成熟中性粒细胞吞噬率74%±15%,吞噬指数126±60;成熟单核细胞吞噬率95%±5%,吞噬指数313±86。
五、注意事项
肝素剂量对白细胞的吞噬功能有影响,肝素用量过大,细胞形态异常,吞噬率和吞噬指数降低;肝素用量过小,影响抗凝。肝素用量以每100μl血用0.3单位为好。