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吞噬功能实验_中性粒细胞吞噬功能测定

2019.4.06

吞噬功能实验在生物体内发挥着重要作用(1)对机体的非特异性免疫功能的检测;(2)对吞噬细胞活性和聚集能力的测定。

实验方法原理中性粒细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN)的功能包括粘附、移动、吞噬杀菌等,是机体天然免疫力的重要组成部分。吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能,在机体非特异性免疫中发挥重要作用。      
实验材料

中性粒细胞

试剂、试剂盒

NBT盐水PBS硝基蓝四氮唑肝素甲醇沙黄水

仪器、耗材

试管毛细滴管玻片培养箱显微镜

实验步骤

一、试管法

 

肝素抗凝血0.1 ml 滴于小试管底部,再加入等量NBT应用液


37℃,30分钟(中间摇动一次),再置室温15分钟

摇匀,用毛细管取一滴放于玻片一端,做血涂片


立即用电吹风吹干,甲醇溶液固定1分钟,10 g/L 沙黄水溶液染色5分钟

PBS冲洗、自然干燥、油镜检测

 

二、微量法

 

取硅油处理的1 mm x 75 mm 的毛细管取末梢血至30 mm 处

立即吹入硅油处理的凹玻片中,与1/30量的0.05%肝素溶液混合

加等量的1 g/L NBT,轻轻摇动混合,湿盒内,37℃,室温15分钟

用毛细管吸去表层上清液,用硅油处理的毛细管吹数次混匀

吸出少许制成血片,空气干燥,沙黄水溶液染色,油镜观察

 

三、结果

1.  血片中有10%以上的中性粒细胞的胞质中有蓝紫或蓝黑颗粒沉着,其沉着颗粒形状大小不一,有的呈大块状,有的呈点状或放射状。

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注意事项

1. NBT配制一定要完全溶解,滤液要呈透明的淡黄色,储存于棕色瓶中;


2. NBT应用液应于用前配制;


3. 血涂片要求推出尾部,不可过厚或过薄。血液与NBT要充分混合,保温时间不能过长;


4. 细胞涂片要轻,以免推破巨噬细胞。涂片不可过厚或过薄,以免影响观察结果。


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