小鼠脂肪间充质干细胞的原代取材
实验概要
小鼠脂肪间充质干细胞的原代取材
主要试剂
含2% SP的DPBS、1 mg/mL胶原酶Ⅰ、间充质干细胞培养液
主要设备
眼科剪、眼科镊、摇床、400目细胞筛、15 mL离心管、3.5 cm培养皿
实验步骤
冰上预冷含2% SP的DPBS。
断颈法处死小鼠，取出其腹部脂肪组织，用预冷的含2%SP（Pen Strep）的DPBS反复漂洗（3～4次）至无血色。
将脂肪组织用眼科剪剪碎成大约1 mm3细小组织块；加入同等体积0.1 %（1 mg/mL）胶原酶Ⅰ消化液转移至15 mL离心管中，37℃恒温消化0.5～1 h。
4.加入等体积间充质干细胞培养液终止消化，室温1000 r/min离心8 min，吸弃上清。
5、间充质干细胞培养液重悬细胞，过400目细胞筛，滤入15 mL离心管，室温1000 r/min离心8 min。
6、弃去上清液及悬浮的脂肪细胞，用间充质干细胞培养液重悬细胞，按每3.5 cm培养皿5×105个细胞的密度接种，标记为原代细胞（P0）。
7、置于37℃、5% CO2、饱和湿度的培养箱中静置培养。
8、24 h后更换间充质干细胞培养液，去除未贴壁细胞。以后每2～3天更换1次培养液。
9、待细胞长至80%～90%融合时传代。
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