色谱法如何检测膨化食品中合成色素
国标GB／T 5009.35—2003食品中合成色素的检验方法有高效液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法。高效液相色谱法由于具有灵敏度高、分离好、快速等特点，已被广泛使用。目前国标法尚未有对膨化食品的合成色素进行检测方法。以下介绍适合于膨化食品中食用合成色素的检测方法。
料与方法
1.材料与仪器
柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝标准溶液，均购自中国计量科学院，浓度为0.5mg／mL；α一淀粉酶(≥500U／mg，Sigma)，甲醇(色谱醇)、乙醇、乙酸铵、柠檬酸、石油醚、甲酸和氨水，均为国产分析纯；聚酰胺粉：100—200目；超纯水由milli—Q水纯化设备自制；膨化食品(市售)。
Waters2695型高效液相色谱仪美国Waters公司；高速冷冻离心机Sartorius公司；恒温摇床Thermo公司；水浴锅。
实验方法
1.样品的前处理
称取粉碎的样品59(精确到0.01g)，放入50mL的离心管中。加入30mL石油醚涡旋3min，放置片刻，弃去石油醚。反复处理数次至石油醚变澄清为止，于水浴上挥干石油醚。加pH=6的水30mL涡旋使样品悬浮起来。然后加入2000Uα-淀粉酶(酶活力：1000U／mL；最适温度60℃；最适pH为5～7)放人温度为60摄氏度，转速200r／min恒温摇床中加热20min，然后将试液放入离心机，于8000r／min离心5min，取上清液移人150 mL烧杯，将离心后的残渣用少量水反复提取至上清液无色为止，所得水洗液合并入烧杯中。
2.样品净化
将上述样品溶液用20%柠檬酸溶液调节pH到4，放入水浴锅中加热到60℃。将lg聚酰胺粉加少量水调成糊状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以G3垂融漏斗抽滤，用60℃pH=4的水洗涤3～5次，然后用甲醇-甲酸(6+4)混合溶液洗涤3～5次，每次10mL。再用水洗至中性。用乙醇-氨水-水(7+2+1)混合溶液解吸数次至洗脱液无色为止，每次5mL，将收集的解吸液用36%乙酸溶液调节至中性，水浴加热至近干。加水定容至5mL。经0.451.tm微孔滤膜过滤，取lOul在高效液相色谱仪上进行测定。
3.测定
色谱条件色谱柱：Waters Symmey ShieldCl8(4.6×250mm，51xrn)；流动相：A为甲醇，B为0.02mogL乙酸铵；线性梯度洗脱：0～15min，A相10%～98%；流速：1.OmL／min；柱温：30℃；进样量：101.tL；波长：254nm；PDA采集波长光谱检测范围为200nm～700nm。
标准系列溶液的配制称取适量柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝标准溶液用超纯水溶解配制为每毫升相当于1.0、5.0、10.0、20.0、50.0pg混合标准系列溶液。将混合标准系列溶液，在上述色谱条件下进行测定，以标准系列溶液浓度为横坐标(x)、相应的峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，绘制标准曲线。
