用高效液相色谱法检测维生素的方法
01 维生素分析原理
直到上世纪90年代初，碳水化合物、蛋白质、脂质、矿物质和水被认为是正常生长、发育和生存所必需的唯一膳食成分。然而，只吃上述饮食的动物通常会异常生长，例如发育不良和发育不良，或死于明显营养不良。
1912年，波兰科学家C.funk将这些特殊营养素命名为“维生素”，其中“vita”表示生活在拉丁语中，“胺”来源于从稻壳中分离出的硫胺素化合物。然而，其他科学家后来发现，所有维生素都不含胺，最终将维生素缩短为维生素。删除维生素的最后一个字母“e”。这是维生素第一次被命名。随着分析科学和医学技术的发展，已经发现了越来越多的维生素。人们开始用字母来区分不同的维生素。维生素A，维生素B1等名称已经出现。
有两种维生素是水溶性维生素和脂溶性维生素,水溶性维生素溶于水，不溶于非极性有机溶剂.吸收后，它们在体内储存较少，排泄过多的尿液。水溶性维生素有,维生素B1,核黄素,维生素B2、烟酸、维生素B6,生物素等维生素维生素C等等，脂溶性维生素可溶于非极性有机溶剂，但不可溶于水。它们可以被吸收并与脂肪一起储存在体内。排泄率不高,脂溶性维生素有维生素A、维生素D等等。
02 维生素分析系统
维生素分析系统是分析水溶性和脂溶性维生素的专用分析仪。维生素不能由我们人体合成，所以它们通常是从外部来源获得的，我们吃的食物,维生素是不稳定的化合物，在样品制备过程中容易氧化和破坏。因此，有必要建立一种简便的方法来减少维生素的降解，从而得到准确的结果。
通常，用分光度法和微生物法分析维生素，由于样品制备过程复杂，过程长，重复性差。近年来，由于高效液相色谱法（HPLC）在维生素分析中的应用，克服了上述问题，结果准确、重复性好。
03样品制备程序
水溶性维生素的样品制备程序
样品100g
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加入100毫升纯净水，使其均化10分钟
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用磷酸将ph值调整为4.5
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加入250毫克菠萝蛋白酶或蛋白酶，加入2.0克α-淀粉酶
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将样品保持在45°C下3小时
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将温度降至室温
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加入10ml20％磷酸沉淀蛋白质
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每分钟10,000转，在5°C离心30分钟
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重复三次蛋白质沉淀过程，加入纯水，使样品溶液达到100毫升。
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通过已用5.0ml甲醇洗涤的C18 Sep-pak柱过滤样品
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用7.0 ml 1％磷酸和10.0 ml 0.1 N NaOH和3.0 ml甲醇：纯水（1:1）溶液冲洗收集柱状液体。
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收集所有溶液并将样品溶液加入100ml
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0.25μm滤膜对样品的过滤
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取10μl样品加入高效液相色谱法。
脂溶性维生素样品制备方法
样品 10g
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向样品中加入75毫升70％乙醇、25毫升17N氢氧化钠和0.5克抗坏血酸。
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用氮气保护，在黑暗中放置一夜（约8-16小时）。
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用正己烷萃取样品
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用水冲洗样品直至达到pH 7.0（通过添加pp检查溶液）
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样品经SEP-PAK（氧化铝、二氧化硅、C18）柱后用乙腈萃取。
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将样品的最终体积定容为10ml
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样品的高效液相色谱分析
