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紫外分光光度法测定维生素B1片的含量

2018.10.11

紫外分光光度法测定维生素B₁片的含量

摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。

关键词 维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法

维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。

1 实验装置及试剂

1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。

1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。

2 实验方法

处方分析：

组成	处方量(g)	比例(%)
维生素B₁	10	16.39
淀粉	20	32.78
糊精	30	49.18
硬脂酸镁	1.0	1.639
生产	1000片

根据处方量分析，维生素B₁含16.39%，辅料含83.61%。平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B₁的片粉约0.15g。

1、测定方法：

取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B₁25mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B₁溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C₁₂H₁₇ClN₄OS.HCl的吸收系数为421计算，即得。

2、方法验证

2.1.线性和范围

精密称取维生素B₁对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B₁ 250μg/ml的对照溶液。分别精密量取该溶液3、4、5、6、7ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，以吸收度（A）对浓度（C）回归处理，得标准曲线和回归方程。

2.2. 回收试验（准确度试验）

对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同2.1项下。

供试品溶液的制备：精密称取维生素B₁精制原料约0.25g，置50ml量瓶中，加入盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，制成5.0mg/m维生素B₁溶液储备液；分别精密量取该溶液4、5、6ml置已加入比例量辅料（0.15g，1/100天平）的100ml量瓶中（一式三份），加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，摇匀，得高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，用对照品比较法计算含量。

2.3、精密度试验

取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B₁25mg），一式5份，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）适量，振摇15min，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，即得约含维生素B₁12.5ug/ml的供试品溶液。

另取维生素B₁对照品适量，用盐酸溶液（9→1000）稀释制成12.5μg/ml的对照品溶液。照分光光度法（ChP2005二部附录IVA）在246nm处分别测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度，用百分吸光度和对照品比较法分别进行计算，即得。

表1 维生素B1标准曲线的制备

编号 1 2 3 4 5

对照液浓度 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50

（ug/ml）

吸光度A 0.312 0.391 0.480 0.559 0.640

图2 维生素B1标准曲线图

由图2可得，采用此法进行维生素B1含量的测定，在浓度为8.00-16.00ug/ml

范围内线性关系较好（R²=0.9997）。

表2 维生素B1片回收率实验结果

编号	加入量（mg）		对照液浓度（ug/ml）		吸光度A	测得对照液浓度（ug/ml）	回收率（%）
1	10.00		10.00		0.370	9.26	92.6
2	10.00		10.00		0.370	9.26	92.6
3	10.00		10.00		0.370	9.26	92.6
4	12.50		12.50		0.455	11.84	94.7
5	12.50		12.50		0.456	11.87	95.0
6	12.50		12.50		0.455	11.84	94.7
7	15.00		15.00		0.539	14.38	95.9
8	15.00		15.00		0.539	14.38	95.9
9	15.00		15.00		0.541	14.44	96.3
		1		2	3	X	RSD	RSD
高		95.9%		95.9%	96.3%	96%	0.24%	1.6%
中		94.7%		95.0%	94.7%	94.8%	0.18%
低		92.6%		92.6%	92.6%	92.6%	0

回收率平均值(%)=94.48%

RSD=1.6%

由表2可得，采用此法进行维生素B1含量的测定，加入量在10.00-15.00mg范围内，对照液浓度在10.00-15.00ug/ml范围内时，回收率较高。

表3 维生素B1片精密度考察实验结果

编号	*加入片粉量（*g）	*吸光度*A	*浓度（ug/ml***）	*百分吸光度法（*%）	对照品比较法（%）	标准曲线%
1	0.1724	0.431	12.57	81.44	95.88	88.38
2	0.1730	0.427	12.61	80.43	94.69	87.14
3	0.1723	0.428	12.61	80.62	94.91	87.38
4	0.1716	0.425	12.51	80.70	95.00	87.35
5	0.1723	0.433	12.56	81.89	96.40	89.03
对照品		0.447	12.50