高速逆流色谱法分离纯化红曲色素组分
摘 要：采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化红曲发酵产品中6种Azaphilone类色素组分。筛选弱极性分离溶剂系统正己烷- 醋酸乙酯- 甲醇- 水，研究6 种色素组分在不同溶剂体系中的分配系数，建立两步逆流萃取分离的技术路线。经过HPCCC 分离纯化和丙酮结晶操作，得到6 种高纯度的Azaphilone 类色素组分，纯度均大于98.5%，得率达到81.40%～84.78%，所得的6 种色素组分的摩尔吸光系数分别为13313、13877、9380、9360、25621、25849L/(mol·cm)。本研究可提供一种新型的制备高纯度红曲Azaphilone 类色素组分的技术路线。
关键词：红曲色素；高速逆流色谱；分离纯化
红曲霉菌发酵产品的生产与应用在我国已有一千多年历史，主要用于食品着色、酿酒和传统中药材。目前国内外对红曲色素产品的需求增长很快。
红曲霉菌生长过程中产生大量的Azaphilone 类代谢产物，其由聚酮合成酶(polyketide synthases，PKS)代谢途径合成[ 1 - 2 ] 。红曲霉菌发酵产品中含有十多种Azaphilone 类化合物，其中最主要的是6 种色素组分，2 种红色素(rubropunctatamine、monascorubramine)、2种黄色素(mo n a s c i n 、a n k a f l a v i n ) 和2 种橙色素(rubropunctatin、monascorubrin)。现代药理学研究表明Azaphilone 类化合物对鞘氨醇激酶、脂肪酸合成酶、端粒酶、gp120-CD4、Grb2-SH2 和p53-MDM2 等，以及3 大疾病(癌症、艾滋病和心血管疾病)相关的关键酶蛋白具有重要的生物活性作用[3-4]。不同红曲色素组分的生物活性，如黄色素的治疗代谢综合症[5]和抑癌[6-8]作用已引起国内外学者的广泛重视。
目前红曲色素商品主要为混合物，色价和色调都不稳定。若能分离纯化单一结构的红曲色素产品，将有利于开拓色素组分的应用范围。高纯度红曲Azaphilone组分及其衍生物的制备有利于新型药物研发和制药产业链的延伸。
图1 中6 种色素组分在化学结构和理化性质上十分相似，分离纯化较为困难。目前市场上未见高纯度的红曲色素产品，也未见单一组分的红曲色素化合物标准品。张慧娟等[9]采用二次薄层层析法分离纯化红斑红曲素，钟立人等[10]采用高效液相色谱研究红曲色素组分的分离，这些方法仅能纯化得到毫克级红曲色素。连喜军等[11]采用树脂法分离红曲黄色素和红色素，但各种树脂对红曲色素的吸附量均低于52U/g。代春华等[12]采用硅胶柱层析法分离红曲黄色素，处理量小且较难实现单一组分红曲色素的分离纯化。夏明等[13]采用高速逆流色谱分离得到一种黄色素与一种紫红色素，但未能对分离得到的色素组成、纯度和得率做进一步分析。
高速逆流色谱技术无需固相载体支持，避免了因发生不可逆吸附而引起的样品损失、变性等问题，分离用有机溶剂易回收使用且节省了分离材料消耗，已广泛应用于各种天然产物及抗生素的分离制备。高速逆流萃取色谱法制备高纯度6 种红曲色素的研究在国内外文献中未见报道。本实验采用乙醇提取- 高速逆流色谱法分离- 结晶的组合技术分离纯化6 种红曲色素组分，以期确立有效的单组分红曲色素的规模化制备技术。
