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起始培养物
生长培养基微载体搅拌培养瓶磁力搅拌器
1. 按照所需最终培养液量的 1/3,以 2~3 g/L 混悬微珠。2. 用胰蛋白酶消化和计数细胞,以正常接种浓度的 3~5 倍将细胞接种到微珠悬液中。3. 以 10~25 rpm 将培养物搅拌 8 h。4. 加入培养液,达到 0.7~1 g/L 的微珠浓度的最终容量。5. 加快搅拌速度至 60 rpm。6. 如果 pH 下降,关闭搅拌器培养 5 min,使微珠沉降下来,然后更换 1/2~2/3 的培养液。7. 收集细胞:(a)吸出培养液。(b)通过沉降法清洗细胞。(c)用胰蛋白酶和 EDTA 处理微珠。(d)让微珠沉降。(e)通过转动使细胞从微珠上脱落下来。(f)通过混悬和离心清洗细胞。
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