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qRT-PCR中体系的配置

2022.10.19

qRT-PCR要求对每个样品做三个平行体系。一般来说,每个最终的反应体系为10μl(然而试剂盒上推荐的体系为25 μl,但这样既浪费酶,用中号枪头加样还降低了重复性)。最好用10 μl小号进口枪头加入。

配体系时,一般先将水、MIX及引物混成3倍体积的总体系(此时应给每管留1.5ul的损耗,另外有些仪器还要求加入适量Passive Reference Dye用于标定仪器),再用排枪分装入qRT-PCR板。模版要在最后,最后,最后用排枪加入(稀释20-30倍后,模版可加至1 μl以上,大大提高了可重复性)。


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