加入接头实验
通过让两个互补的引物退火构建接头，首先应使引物 1B 和 2B 的 5'末端磷酸化。
现代神经科学研究技术
作者：U.Windhorst & H. Johansson 翻译：赵志奇 陈军
| 试剂、试剂盒 | |
|---|---|
| 实验步骤 | 1.稀释引物IB和2B, 至质量浓度为350ng/V。 2.加入下列试剂进行引物5’末端磷酸化： 3.在37℃ 下孵育30 min。 4.在65℃ 下放置 10 min热失活PNKo 5.将36ul 的引物IA加入到80ul磷酸化的引物1B中，同样加36ul引物2A到磷酸化的2B(终浓度为217ng/ul)。 6.使引物退火：先加热到95℃，保持 2 min, 随之在65℃ 下放置lOmin，在37℃ 下放置 10 min, 再在室温下放置20 min。
实验方案 A1.将接头 1 连接到一份结合于 Dynabeads 上的已被 NlaIII 酶解的 cDNA，接头 2 则连接于另一份。在冰上操作加入下述物质： 2.加热到 50C, 保持2 min, 然后在室温下放置15 min，使接头与 MaIII 酶解的 cDNA 退火。 3.加入 2ul T4 DNA 连接酶（5U/ul), 然后在 16°C 连接接头 2 h。 4.在接头连接完成后，用 2004 的 IX 结合及冲洗缓冲液冲洗磁珠 4 次，再用 200ul 的 1X 限制性缓冲液冲洗 2 次。 5.完成最后一步冲洗后，固定磁珠并移去 LoTE。 展开 |
推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
-
仪器推荐
询底价 Tel：400-6699-117 转 5942 -
仪器推荐
热点排行
一周推荐
