3M大肠杆菌/大肠菌群快速检验测试片操作以及判读

2020.9.21

　　一、测试大肠杆菌/大肠菌群操作方法

　　1、未开封时，冷藏于≤8℃（≤46℉），并在保存期内用完，高温度时，凝固水可以排除，包装物最好于室温启开。

　　2、已开封的，将封口以胶带封紧。

　　3、保存再封的袋于≤25℃（≤77℉）和温度<50％，不要冷藏已开启的包装袋，并于一个月内使用完。

　　4、制备1：10和更大稀释的食物样品稀释液，称取或吸取食物样品，置入适宜的无菌容器内，如均质袋、稀释瓶、WhirlPak bag或者其他灭菌容器内.

　　5、加入适量的无菌稀释液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4调PH7.2) 、0.1%的蛋白胶水(ISO方法6887) 、缓冲蛋白胶水(ISO方法6579) 、盐溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸馏水.

　　但不可用含有枸橼酸盐、bisulfite or thiosulfate的缓冲液. 因为它能抑止菌生长。

　　6、搅拌或均质样品

　　酸性样品的稀释液用INNaoH调PH6.5－7.5，对碱性样品的稀释液用IN HCL调PH6.5－7.5。

　　7、将测试片置于平坦表面处，揭开上层膜。

　　8、使用吸管将1ml样液垂直滴加在测试片的中央处。

　　9、细心将上层膜缓慢盖下，避免有气光泡产生，切勿使上层膜直接落下。

　　10、使用压板（平面底朝下）放置在上层膜中央处。

　　11、轻轻的压下，使样液均匀覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转压板。

　　12、拿起压板，静置至少1分钟以使培养基凝固。

　　13、测试片的透明面朝上，可堆叠至20片，对有一定湿度养箱能保持最少份损失是需要的。

　　14、可目视及用标准菌落计数器或其它的照明放大镜计数，并可参考判读卡计算菌落数。

　　15、可以分离菌落作进一步鉴定，即掀起上层膜，由培养胶上挑取单个菌落。

　　二、测试大肠杆菌/大肠菌群判读方法

　　Petrifilm ColiformTM Coliform测试片含有VRB培养剂 (Violet Red Bile)，一种冷水可溶性的凝胶剂和四唑翁(tetrazollium)指示剂，可增强菌落计数效果。绝大多数E .coli（约占97%）能产生-葡萄糖甘酸酶与培养基中的指示剂反应，产生蓝色沉淀环绕在大肠杆菌菌落周围，表面覆盖的胶膜，可留住发酵乳糖的大肠菌群产生的气体，约有95%的大肠杆菌产生，形成蓝色或深蓝上菌落并有气泡相连接，气泡大小约为1个菌落直径。

　　AOAC和FDA细菌学分析手册（RAM）规定大肠菌群为革兰氏阴性杆菌，发酵乳糖产酸产气。大肠菌群菌落在Petrifilm CC测试片上生长产酸，PH指示剂使培养基颜色变深，在红色菌落周围有气泡者，为大肠菌群细菌。大肠杆菌鉴定，在不同国家可以有变更（见培养时间和温度部分指示）。

　　该测试片不能单独测定E.coli O157,像大多数其他E.conliform培养基一样,它没有专门指示是否有任何0157菌株的存在.

　　AOAC确认的方法:

　　E.coli=49(蓝色菌落带有气泡)

　　Total coliform=87(红色和蓝色菌落带有气泡)

　　No growth=0

　　注意图2到8 培养基颜色的变化,随着E.coliform菌数增多,培养基颜色变成暗红色或蓝紫色,背景的泡(沫)为培养基现象,不是大肠杆菌或大肠菌群生长结果,见方框1.

　　E.coli connt=13

　　Total coliform count=28

　　Petrifilm Ec测试片菌落数适宜计数范围是15-150,不要计算圆形培养基外的菌落,因为泡棉上已不含选择性培养基.见圆圈!

　　E.coli count=3

　　任何蓝色菌落(蓝色到红蓝色)表明有E.coli存在,正面照明增强形成蓝色沉淀菌落的测定,圆圈1示为背面光照的红蓝菌落,圆圈2示为同一菌落的正面光照蓝色沉淀更明显些.