紫外分光光度法测定L—-抗坏血酸多聚磷酸酯中有效VC含量
本文建立了紫外分光光度法测定L-抗坏血酸多聚磷酸酯中有效维生素C含量的方法。该方法结果准确、稳定， RSD〈1%，在线性范围内，相关系数R=0.9995。对于生产和质量控制具有积极的指导意义。
L-抗坏血酸是畜禽类动物特别是水产动物必需的维生素营养品。由于L-抗坏血酸本身的强还原性，作为饲料添加剂，其加工过程中所带来的氧化、降解损失是非常大的。L-抗坏血酸多聚磷酸酯是目前最为稳定的维生素C类衍生物，由于同时含有两个活性基团- L-抗坏血酸及三聚磷酸，在饲料行业特别是水产饲料行业具有广阔的市场前景。
L-抗坏血酸多聚磷酸酯含量的检测，目前国际上基本是使用高效液相色谱法，本文确立的紫外分光光度法测定L-抗坏血酸多聚磷酸酯中有效维生素C含量的方法消除了杂质物质特别是游离VC对结果的干扰，具有方法简单、操作简便、结果准确、重现性好等特点,在生产和质量控制中得到广泛应用。
材料与方法
仪器及试剂
TU-1901型双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，pH-3型酸度计，维生素C标准(自制)，L-抗坏血酸多聚磷酸酯对照品(瑞士罗氏公司)，Na2CO3试剂，现用现配，以上试剂均为分析纯，水为纯化水。
试验方法
准确称取供试品1.0000g,用0.1mol/L碳酸钠溶液溶解后，定容于100ml棕色容量瓶中,准确吸取样品溶液1.00ml于100ml容量瓶中,用0.1mol/L碳酸钠溶液定容摇匀后放置30min,以0.1mol/L碳酸钠溶液为空白,在260±3nm处测定其吸光值，根据效价系数计算其有效VC含量。
工作曲线的绘制
由VC多聚磷酸酯对照品的浓度对吸光度做曲线，当VC多聚磷酸酯的浓度在2.0～3.0mg/100ml时，相关系数R=0.9995，此条件下相关线性很好，求得吸收系数K。
结果与讨论
吸收光谱的确立
最大吸收波长与被测溶液pH值关系密切，即不同的溶液pH值将使最大吸收波长产生紫移或红移。将一定量的样品与对照品经本实验方法处理后，经紫外分光光度法进行全波长扫描，最大吸收波长范围为260±3nm，以此做为测定波长。
酸度的影响
由于产品L-抗坏血酸多聚磷酸酯中含有多种辅料及杂质，在不同的溶液pH值范围内，杂质存在对有效VC含量的影响效果是不同的。对样品溶液分别配制成相同浓度，但pH从1.0～14.0不同的样品溶液，经全波长扫描。经试验优选了最佳pH值在10.0～12.0，消除了检测干扰，保证了结果的准确和稳定，最佳pH值调节剂为0.1mol/L的碳酸钠溶液。
反应时间的影响
试验发现：影响L-抗坏血酸多聚磷酸酯中有效维生素C含量稳定性的最关键因素是溶液的pH值和放置时间(如表1所示)。
表1. L-抗坏血酸多聚磷酸酯中有效维生素C稳定性考查数据
|
放置时间min |
0 |
5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
40 |
|
有效VC含量％ |
46.8 |
40.3 |
38.6 |
37.4 |
36.9 |
36.6 |
36.4 |
36．4 |
由上表可以看出：试验条件下放置30min以后，结果趋于稳定，即干扰物质的影响因素被消除，保证了检测结果的准确性。
样品中辅料和杂质对检测结果的影响
由生产工艺可知，产品L-抗坏血酸多聚磷酸酯中除主要成份L-抗坏血酸多聚磷酸酯外，还残存有多种未反应完全的反应原料及反应副产物，在用紫外分光光度法测定L-抗坏血酸多聚磷酸酯中活性成份维生素C时，它们将对检测结果产生不同的影响。试验验证，产品中残留物质对检测结果的影响如表2所示。
表2. 产品中残留组分对检测结果的影响分析
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残存物质 |
产品中残存量% |
对检测结果影响 |
解决问题方法 |
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维生素C钠 维生素C钙 |
〈6 |
严重影响活性维生素C结果测定，增加溶液的混浊度。 |
调节溶液最佳pH值；放置时间在最佳范围内测定结果。 |
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氢氧化钙 氢氧化钠 |
〈2 |
增加溶液的混浊度 |
过滤消除浑浊物，对滤渣分次洗涤，保证滤渣中有效组分的全部回收。 |
|
三偏磷酸钠及各种磷酸盐 |
〈2 |
经紫外波长扫描,该组分在紫外区内无吸收，对维生素C含量检测没有影响。 |
不用考虑。 |
线性范围的确定
由VC多聚磷酸酯浓度对吸光度做曲线，当VC多聚磷酸酯浓度低于1.5mg/100mL时,吸光度低于线性范围，产生负偏差。当浓度高于3.0mg/100mL时高于线性范围，产生正偏差。VC多聚磷酸酯的浓度在1.5～3.5mg/100mL时，相关系数R=0.9866，当VC多聚磷酸酯的浓度在2.0～3.0mg/100mL时，相关系数R=0.9995，因此浓度在2.0～3.0mg/100mL时，线性相关很好，此时便可求得吸收系数K。
回收率试验
根据产品中残留的各种组分，按一定配比填加相关各组分及L-抗坏血酸多聚磷酸酯，测定及回收情况见表3。
表3. L-抗坏血酸多聚磷酸酯中有效维生素C测定及回收情况
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样品批号 |
001 |
002 |
003 |
004 |
005 |
|
标示量值％ |
36.3 |
36.4 |
36.0 |
36.2 |
36.4 |
|
检测值％ |
36.0 |
36.0 |
35.6 |
36.5 |
36.0 |
|
回收率％ |
99.2 |
98.9 |
98.9 |
99.2 |
98.6 |
由表3数据可以看出，产品的回收率大于98%，符合测定要求，因此本方法数据准确、真实、可靠。
准确性验证
抽取五批产品样品，经高效液相色谱检测，并与本文所确立的紫外分光光度法测定结果对比如表4所示。
表4. 液相法与紫外法检测结果对比
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样品批号 |
001 |
002 |
003 |
004 |
005 |
|
高效液相法％ |
36.3 |
36.4 |
36.0 |
36.2 |
36.4 |
|
紫外分光法％ |
36.1 |
36.2 |
36.1 |
36.2 |
36.2 |
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相对偏差％ |
0.55 |
0.85 |
0.28 |
0 |
0.55 |
从以上结果可以看出，两种检测方法绝对偏差<0.3%，相对偏差<0.9%，在仪器检测误差范围内，数据非常吻合，被检产品数据得到了国外客户的高度认同。
小结
采用本方法检测结果,对生产和质量控制提供了积极的帮助, 产品检测数据得到了国外客户的高度认同。
