细胞形态异常，鱼骨图来帮忙（五）
细胞培养过程中
细胞辅助试剂是不可或缺的角色
那么它是怎么影响细胞形态的呢？
BI中国市场部带您分析分析~
细胞辅助试剂可分为以下四部分：
接下来我们逐条分析！
胰酶
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什么情况下是胰酶可能出现了问题呢？
一旦发生消化时间逐渐拉长，或是细胞消化不下来，需注意胰酶是否已经失活。由于胰酶为蛋白类产品，反复冻融容易影响其活性。
品质不佳的胰酶也容易带入支原体或动物源性污染源，BI所生产的胰酶经过辐射照射处理，确保品质及有效杜绝支原体的引入。
临床培养可选用重组胰酶，以避免引入未知动物源病原体。
解决方案：
一般胰酶保存方式，建议15或50ml分装后-20℃冻存，使用前必须37℃水浴或培养箱回温，胰酶消化后使用不含钙镁的缓冲液清洗细胞，以稀释残余的胰酶。
若使用无血清培养基培养时（血清中含有胰酶抑制蛋白），使用胰酶消化后可使用胰酶抑制剂终止残存胰酶反应。
| 产品名称 |
Trypsin Solution B（0.25%）, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red |
Trypsin Solution B（0.25%）,10X Conc, without Calcium and Magnesium, without Phenol Red |
Crystalline Trypsin Solution（0.02%）, without Phenol Red |
Trypsin EDTA Solution A（0.25%）,EDTA（0.02%）, with Phenol Red |
Trypsin EDTA（0.5%）, EDTA（0.2%）,10X Conc, without Phenol Red |
Trypsin EDTA Solution B（0.25%）,EDTA（0.05%）, with Phenol Red |
Trypsin EDTA Solution C（0.05%）,EDTA（0.02%）, with Phenol Red |
Trypsin EDTA Solution C（0.05%）,EDTA（0.02%）, without Phenol Red |
Soybean Trypsin Inhibitor 50X Conc., 5mg/ml |
缓冲液
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细胞在胰酶消化传代之前，应使用PBS洗涤残留的完全培养基（完全培养基中的血清含有胰酶抑制蛋白），如果是对于一些更难消化的细胞，则必须使用不含Ca2+，Mg2+离子的PBS，因为这些离子也会抑制酶的活性。
解决方案：
产品名称 |
Hanks' Balanced Salt Solution，With Calcium and Magnesium With Phenol Red |
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), without Calcium and Magnesium |
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS), 10X Conc., without Calcium and Magnesium |
Phosphate Buffered Saline (PBS), PH=7.4, without Calcium and Magnesium |
Phosphate Buffered Saline (PBS), PH=7.4, without Calcium and Magnesium，10X Conc. |
应从正规供应商处购买，以确保品质，如渗透压、无菌等。
冻存液
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冻存液中的抗冻剂对细胞多少具有毒性，所以细胞解冻复苏时，不宜在冷冻管内悬浮太久，需在解冻复苏后尽快转移到完全培养基中，并在隔天置换掉含有抗冻剂的培养基。
细胞的状态不佳，可提高培养基内血清的比率，隔天就更换培养基，以置换掉含有DMSO的培养基。也有可能有些细胞本身冷冻后存活率不佳或冷冻时的细胞数较少。
如以上都有注意到，但复苏率仍然不佳，就必须考虑是否为冻存操作步骤出了问题，是否程序降温、或冻存前细胞状态已不佳（存活率低）。
解决方案：
建议选取指数增长时期的细胞冻存，此时细胞状态较佳。
中文名称 |
无血清细胞冻存液 |
无血清间充质干细胞冻存液 |
无血清干细胞冻存液 |
D10无血清冻存液 |
抗生素
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细胞在体内是无菌生长状态，所以抗生素对细胞会有一定程度的影响。
已知某些抗生素对细胞的不同影响，如：
β-内酰胺类抗生素（青霉素）--会影响蛋白质合成，抑制细胞生长增殖；
2. 氨基糖苷类/氨基糖类（链霉素，卡那霉素，庆大霉素）--会减少蛋白质合成，ATP水平降低，产生细胞毒性；
3. 内酯类（两性霉素B/fungizone, 制霉菌素）--干扰细胞膜，产生细胞毒性；
所以一般常规细胞培养，请尽量降低抗生素使用率，避免上述影响及细菌抗药性产生。
解决方案：
中文名称 |
两性霉素B 250mg/ml |
两性霉素B 2500mg/ml |
制真霉素 |
青链双抗 |
青链双抗，10X浓缩 |
青链霉素+制真霉素 三抗 |
青链霉素+两性霉素B 三抗 |
青链霉素+新霉素 三抗 |
硫酸庆大霉素溶液 |
卡那霉素溶液 |
使用抗生素的时机：
原代细胞培养时---因为在从组织分离时易带入污染；
2. 观察到，并且确认是微生物污染时（去除微生物后，应立即停用抗生素）；
3. 尽量避免使用抗生素作为预防的方法；
文章来源：http://tech.xpbiomed.com/
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