免疫荧光检查的检查方法及临床意义
检查方法
免疫荧光检查可分直接法、间接法、夹心法和补体法。
1. 直接法
将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。
（1）滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10分钟后弃去，使标本保持一定湿度。
（2）滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30分钟）。
（3） 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序经过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3～5 分钟，不时振荡。
（4）取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。
（5）立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度来判断免疫复合物的多少，常用半定量法，（-）阴性，无荧光；（±）高倍镜下似乎可见；（+）低倍镜下似乎可见，高倍镜下明显可见；（++）低倍镜下明显可见，高倍镜下清晰可见；（+++）低倍镜下清晰可见，高倍镜下耀眼；（++++）低倍镜下耀眼，高倍镜下刺眼。
2. 间接法
如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗原—抗体—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。
（1）滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于已知抗原标本片，10分钟后弃去，使标本片保持一定湿度。
（2）滴加以0.01mol/L，pH7.4的PBS适当稀释的待检抗体标本，覆盖已知抗原标本片。将玻片置于有盖搪瓷盒内，37℃保温30分钟。
（3）取出玻片，置于玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗1～2次，然后按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸5分钟，不时振荡。
（4）取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，滴加一滴一定稀释度的荧光标记的抗人球蛋白抗体。
（5）将玻片平放在有盖搪瓷盒内，37℃保温30分钟。
（6）重复操作步骤（3）。
（7）取出玻片，用滤纸吸去多余水分，滴加一滴缓冲甘油，再覆以盖玻片。
（8）荧光显微镜高倍视野下观察，结果判定同直接法。
临床意义
1.直接法
（1）细胞间荧光提示天疱疮。
（2）基底膜荧光带：在系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮的皮损，均可见颗粒状的以IgG为主的带状分布。在类天疱疮为线状的以IgG为主的带状分布。
（3）在真皮内血管壁见到圈状荧光提示血管炎。
2.间接法
抗核抗体阳性可见于以下疾病。
（1）风湿性结缔组织病：红斑狼疮、硬皮病、干燥综合征、类风湿性关节炎等。
（2）增生性疾病：高球蛋白血症性紫癜、巨球蛋白血症、淋巴瘤、慢性白血病、癌肿等。
（3）感染性疾病：结核病、瘤型麻风、组织胞浆菌病。
抗核抗体本身并非特异，滴度和核型对诊断也有重要参考价值。因此除定性外，还应结合滴度、核型及临床体征才具有较大价值。
3.补体结合法
常用来检测患者的自身抗体，如妊娠疱疹患者。
