新生儿促甲状腺素（TSH）检测试剂盒使用说明（一）
用途
本试剂盒为体外测定试剂盒，用酶联免疫法定量测定滤纸片上干燥血标本中的促甲状腺素（hTSH），作为新生儿先天性甲状腺机能减退症（简称“甲低”）的筛查。
前言
先天性“甲低”是以外周血甲状腺激素（T3和T4）水平降低为特征的新生儿内分泌障碍。世界范围内先天性“甲低”的平均发病率为1：4，000。此疾病特点是外周血中甲状腺激素低于正常水平，而促甲状腺素高于正常水平。人的促甲状腺素是由脑垂体前叶合成分泌的。他调节和刺激甲状腺产生甲状腺激素。甲状腺激素缺乏刺激hTSH分泌，存在负反馈。hTSH水平也受下丘脑分泌的促甲状腺素释放激素的影响。因此，新生儿外周血促甲状腺素浓度提高，可作为筛查判断先天性“甲低”的根据。
新生儿出生前后时期和出生后几个月内甲状腺激素的不足将妨碍其大脑的正常发育，其最终结果是导致不可修复的大脑功能障碍和骨骼神经系统发育障碍。早期筛查出新生儿先天性“甲低”，用甲状腺激素的替代治疗可防止大脑的发育不良。
原理
1．新生儿促甲状腺激素酶联免疫测定法（Neonatal hTSH EIA）是一种固相双位点酶免疫测定法，滤纸片上干燥血标本洗提出hTSH，同时与包被在酶标板上抗hTSH的单克隆分子和辣根过氧化物酶标记的抗hTSH亚单位的第二抗体结合。
2．过剩的酶结合物和未结合的hTSH被洗涤去掉，加入四甲基联苯胺（TMB）底物溶液进行酶反应。
3．加入1N硫酸（H2SO4）溶液终止酶反应，用酶标读数仪在450nm下测定吸光度值。
试剂盒组成
试剂盒贮存在+2—+8℃。
不要使用过期试剂。
试剂盒使用前，所有试剂及酶标板放置+18—+25℃平衡30分钟。
TMB底物是光敏感性的，应避免光照。
所有试剂组份一旦开启，密封袋或盖子紧紧密封。
1 抗-hTSH包被的反应板 10块（12×8孔）
2 辣根过氧化物酶标记的抗-hTSH酶结合物（浓缩100X） 2.5ml
3 酶结合物稀释液 250ml
4a TMB显色剂(25X) 9.5ml
4b 底物缓冲液 250ml
5 洗涤液（浓缩10X） 220ml
6 hTSH标准品 1张5套，每套6个标准品，用锡箔袋包装。
每批标准品的数值是不相同的，每套试剂盒内都有确切的数值。
7 hTSH质控 C1-C2 1张5套，含2个质控，用锡箔袋包装。
每批质控的数值是不相同的，每套试剂盒内都有确切的数值。
8 终止液 0.45M 硫酸
酶标反应板的塑料粘胶贴 10张
质控和标准品的TSH数值表 1张
试剂的准备
表1 试剂的准备
试剂 | 准备 | 开启或稀释后的稳定性（+2—+8℃） |
1 抗-hTSH包被的反应板 | 直接使用 | 2个月 |
2 辣根过氧化物酶标记的抗-hTSH酶结合物（浓缩） | 临用前，用酶结合物稀释液按1：100（1+99）稀释配制。（见表2） | 5个月 废弃未用完的酶结合物溶液 |
3 酶结合物稀释液 | 供配制酶结合物溶液用 | 10个月 |
4 底物溶液 | 临用前，用底物缓冲液（4b）按1：25（1+24）将TMB显色剂（4a）稀释成底物溶液。 | 废弃未用完的底物溶液 |
4a TMB显色剂 | 直接供配制底物溶液用 | 6个月 |
4b 底物缓冲液 | 直接供配制底物溶液用 | 6个月 |
5 洗涤液（浓缩） | 用蒸馏水按1：10（1+9）稀释 | 6个月 废弃有浑浊的洗涤液 |
6 hTSH标准品 | 直接使用 | 3个月 |
7 hTSH质控 8 终止液 | 直接使用 直接使用 | 3个月 6个月 |
表2酶结合物和底物溶液的准备配制
酶标板数（块） | 酶结合物（2） （ml） | 酶结合物稀释液（3）（ml） | TMB-显色剂（4a）（ml） | 底物缓冲液（4b）（ml） |
1 | 0.24 | 24 | 1 | 24 |
2 | 0.42 | 42 | 2 | 48 |
3 | 0.62 | 62 | 3 | 72 |
4 | 0.82 | 82 | 4 | 96 |
5 | 1.00 | 100 | 5 | 120 |
6 | 1.20 | 120 | 6 | 144 |
7 | 1.38 | 138 | 7 | 168 |
8 | 1.58 | 158 | 8 | 192 |
9 | 1.76 | 176 | 9 | 216 |
10 | 2.00 | 200 | 10 | 240 |
