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系统性红斑狼疮相关实验室检查之抗核抗体

2019.11.08

    抗核抗体(ANA) 是指一组对细胞核或细胞浆内核酸和核蛋白的自身抗体。一般采用间接免疫荧光法检测血清ANA,以动物组织(鼠肝等)或体外培养细胞株(HEP-2细胞等)为底物。在临床上是一个极有用的筛选试验。SLE中约80%~95%的病例ANA呈阳性反应,反复测定,累积阳性率接近100%。因不同底物所含的抗原不同,所测得的ANA的结果也不尽相同,如鼠肝含Ro/SSA抗原量低于HEP-2细胞,故含Ro/SSA抗体的血清在鼠肝为底物作ANA测定时呈阴性结果,若改为HEP-2为底物则呈阳性。鉴于正常人和某些疾病中也可能出现低滴度的ANA,因此血清ANA效价≥1∶80,意义较大。ANA更确切的名称应为抗核抗体谱,ANA的滴度与疾病的活动性并非完全平行,如若其中以抗dsDNA为主,则ANA滴度随疾病缓解后可下降或转阴;若以抗ENA抗体为主,则ANA滴度与疾病活动性无明显相关。

    荧光核型可见周边型、均质型和斑点型,偶见核仁型,核型与ANA中抗体的种类有关。在SLE中常见的ANA有:

    1.抗脱氧核糖核酸(DNA)抗体 抗DNA抗体有抗双链DNA(dsDNA)和抗单链DNA(ssDNA)之分。抗dsDNA抗体荧光核型示周边型,为SLE所特有,提示患者常有肾损害、预后差。常用的检测方法有同位素125Ⅰ标记ds-DNA抗原的放免法、用短膜虫或马疫锥虫为底物的间接免疫荧光法(IFA)、胶体金快速斑点渗滤技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)。放免法敏感性高,阳性率于SLE患者中>60%,活动期患者中阳性率可达95%。以短膜虫为底物的IFA法因其动基体含有纯的dsDNA,故特异性高,SLE患者中阳性率>45%,活动期患者中亦可高达93%。胶体金快速斑点渗滤技术通常用纯化的不含单链DNA的均一大肠杆菌质粒dsDNA作为抗原,其敏感性和特异性与上述IFA法相似,但更简捷、方便、快速,数分钟即能出报告。ELISA操作简便,也有滴度可作为量化的客观指标。

    2.抗脱氧核糖核酸核蛋白(DNP)及组蛋白抗体 这两种抗体的荧光核型均显示为均质型,前 者与LE细胞现象有关,SLE中阳性率约70%;后者阳性率约30%~50%,在药原性狼疮中阳性率90%以上。

    3.抗核小体抗体(AnuA) 近年来发现AnuA在SLE中特别是活动性狼疮和狼疮肾炎诊断中的敏感性可达69.9%~71%、特异性达97.3%~99%,尤其在抗dsDNA、Sm抗体阴性时具有重要意义。

    4.抗生理盐水可提取核抗原(ENA)抗体 是一组针对细胞内抗原可溶于生理盐水中,可提取核抗原的自身抗体,故称为生理盐水可提取核抗原。实际上ENA也包括了一部分胞浆抗原和既在核内又在胞浆内的抗原。目前通常用免疫印迹法(IBT)、免疫双扩散法(ID)和酶免疫分析法(EIA)检测,前两者可互相验证和补充,后者灵敏度高,快速简便。临床常用者有:

    (1)抗Sm抗体:作用的抗原是U族小分子细胞核核糖核蛋白粒子(UsnRNP),由富含尿嘧啶核苷的U族RNA(U1、U2、U4、U5和U6RNA)与一组核蛋白组成。Sm的抗原性存在于29KD、28KD和13.5KD上。一般认为抗Sm抗体是SLE标记抗体,阳性率为21%~30%。此抗体与病情活动及狼疮性肾炎等未发现有明确的关联。

    (2)抗U1RNP抗体:作用的抗原为U1snRNP,在U1snRNP中,70KD、A和C蛋白上存在其抗原决定簇。免疫印迹检测于73、32、29、28、17.5KD处有显色区带。该抗体可在多种炎症性风湿病中出现,在SLE中阳性率40%左右,高滴度的U1RNP是诊断混合结缔组织病的重要血清学依据。

    (3)抗Ro/SSA和La/SSB抗体:抗Ro/SSA抗体的作用抗原为小分子细胞浆核糖核蛋白粒子(scRNP),由胞浆Y族(Y1~Y5)RNA与分子量分别为60KD和52KD的蛋白多肽构成,抗原性在多肽上。抗La/SSB抗体的作用抗原亦为小分子核糖核蛋白粒子,存在于胞核和胞浆内,由RNA聚合酶Ⅲ转录而来的RNAs与48KD的蛋白多肽构成。抗Ro/SSA抗体在SLE中的阳性率为30%~40%,在SCLE中阳性率63%,由于该抗体能通过胎盘,故新生儿狼疮中几乎均能查到该抗体。以鼠肝为底物的ANA免疫荧光试验阴性的SLE患者血清,大多能测出Ro/SSA抗体,因此在末用对流免疫电泳法除外抗Ro/SSA抗体存在时,不诊断为“ANA阴性的SLE”。抗La/SSB抗体在SLE中的阳性率为10%~20%。抗Ro/SSA和La/SSB抗体阳性的患者多有光敏性皮损、血管炎、紫癜、淋巴结肿大、白细胞减少和类风湿因子阳性并合并干燥综合征。

    (4)抗核糖体RNP(rRNP)抗体:该抗体所作用的抗原是核糖体大亚基上的三条分子量分别为38KD、16.5KD和15KD的磷酸化蛋白。该抗体于SLE中阳性率为24%,是诊断SLE的又一个标记性抗体。

    5.其他 

    文献中报导SLE患者中尚可测出抗Ku抗体,抗内皮细胞抗体,抗中性粒细胞胞浆抗体,抗神经元抗体,抗层素和抗纤维结合蛋白抗体、抗Ⅶ型胶原抗体和抗神经节苷脂抗体等,这些抗体检测的阳性率,特异性与临床症状的关联,有待进一步深入研究。

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