脑脊液的化学检验(一)
一、蛋白质定性检查(潘氏球蛋白定性试验)
1、潘氏球蛋白定性试验原理 脑脊液中蛋白质主要是球蛋白与苯酚结合,可形成不溶性蛋白盐而下沉,产生白色混浊或沉淀。
2、试剂
5%苯酚溶液:取纯苯酚25ml,加蒸馏水至500 ml,用力振摇,放置37℃温箱内1~2天,待完全溶解后,置棕色瓶内保存。
饱和苯溶液:取苯酚10 ml,加蒸馏水至100 ml,充分混匀,置入37℃温箱中数小时,见底层有酚析出,上层即为饱和酚溶液。避光保存,一般置棕色瓶内保存。
3、操作 取试剂2~3 ml,置于小试管中,用毛细滴管滴入脑脊液1~2滴,在黑色背景下立即观察结果。
4、结果判断
阴性(-):无混浊,清晰透明,不显雾状。
极弱阳性(±):微呈白雾状,对光不易看到,在黑色背景下才能看到。
弱阳性(+):呈灰白色白雾状。
阳性(++):呈白色薄云雾状混浊。
强阳性(+++):呈白色絮状沉淀或白色浓云块状。
最强阳性(++++):立即形成白色凝块。
5、方法学评价 潘氏(Pandy)试验所需标本量少,操作简单,结果观察较为明确,临床试验室常用此法。但该方法过于敏感,有一部分正常人也可出现极弱阳性(±)结果。
6、注意事项
(1)红细胞过多时,须先离心使细胞沉淀,吸取上清液进行试验。
(2)试验中所用试管应十分洁净,否则易出现假阳性结果。
(3)所用试剂苯酚如不纯,亦可引起假阳性反应;室温低于10℃,酚饱和度低,亦可引起假阳性结果。
7、正常参考值 正常脑脊液中蛋白质含量仅是血浆蛋白的1/200,即0.2~0.4g/L,其成分以白蛋白为主,故蛋白定性试验结果为阴性或极弱阳性(±)。
8、临床意义 有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反应,如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰白质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈强阳性反应,如外伤性血液混入脑脊液中,亦可呈阳性反应。
二、总蛋白定量测定
脑脊液蛋白定量测定可参照尿液蛋白定量,常用的方法为双缩脲法和染料结合法。临床检验多采用磺基水杨酸-硫酸钠比浊法。
1、原理 磺基水杨酸为生物碱试剂,能沉淀蛋白质,但对白蛋白的沉淀能力比球蛋白强,加适量硫酸钠后,沉淀白、球蛋白的能力趋于一致,与标准蛋白浊度对比进行定量测定。
2、试剂 磺基水杨酸-硫酸钠试剂(SS-S)
磺基水杨酸 3.0g
无水硫酸钠 7.0g
蒸馏水 加至100ml
过滤后,储存于棕色瓶中,如显色或混浊则不能用。
3、方法
(1)制备标准曲线 含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀释混合人血清标准系列各0.5 ml,加SS-S试剂4.5 ml,充分混匀,7~15分钟后,用420nm波长比浊,以吸光度为纵坐标,蛋白质浓度为横坐标,绘制标准曲线。
(2)样品检测 取待测脑脊液标本各0.5 ml于两只试管中,其中一只试
管加SS-S试剂4.5 ml,另一试管加154mmol/L的NaCl溶液4.5 ml作为标本空白管。在与标准曲线相同的条件下比浊,所得得吸光度可从标准曲线上求得蛋白质浓度。
4、注意事项
(1)脑脊液如有多量细胞或混浊,应先离心以除去。如蛋白质浓度过高,应先行用生理盐水稀释后重新测定。
(2)加入SS-S试剂的操作手法和速度、室温及比浊前的放置时间都会影响实验结果。故操作时应注意控制加入试剂的方式和比浊时间与标准管一致。应随气温改变,勤作标准曲线。
5、正常参考值
腰穿CSF蛋白含量:0.2~0.4g/L 池穿CSF蛋白含量:0.1~0.25 g/L
侧脑室穿刺CSF蛋白含量:0.05~0.15 g/L
脑脊液蛋白质含量与年龄成正比,儿童含量较低,成人稍高,老年人又比成年人高。
6、临床意义 脑脊液蛋白质含量增高,为血脑屏障被破坏的标志。颇受临床工作者的重视。
蛋白质含量增高常见于下列情况:
(1)中枢神经系统炎症。脑部感染时,脑膜和脉络丛毛细血管通透性增加,蛋白质分子容易透过,首先是白蛋白增高,随后是球蛋白和纤维蛋白增高。
(2)神经根病变。如急性感染性多发性神经炎(Guillain-Barre综合征),多数病例有蛋白质增高,而细胞数正常或接近正常,即蛋白-细胞分离现象。
(3)椎管内梗阻。脑与蛛网膜下腔互不相通,血浆蛋白由脊髓中的静脉渗出,CSF蛋白质含量显著增高,有时高达30~50g/L,这时CSF变黄,可自行凝固。如脊髓肿瘤、转移癌、粘连性蛛网膜炎等。此外,早产儿CSF蛋白含量可达2 g/L,新生儿为0.8~1.0 g/L,出生两个月后逐渐降至正常水平。
含血的CSF蛋白质含量增高。为了鉴别原来有无蛋白质增高,可用每升红细胞700×106个约相当增加蛋白质量0.01 g/L来推算,用含血CSF的蛋白质含量减去含红细胞数折算成的蛋白质含量,即为原来CSF的蛋白质含量。