脑脊液的化学检验（三）
5、基质金属蛋白酶谱（MMPs） MMPs属于含锌的金属蛋白酶家族，是有底物特异性的多种钙离子依赖肽链内切酶。人脑中已发现的有明胶酶A（MMP2）、明胶酶B（MMP9）、胶原酶（MMP1）和基质溶素（MMP3）等多种MMPs。MMPs是以无活性的形式分泌，随后由血浆纤维蛋白溶解酶和其它丝氨酸蛋白酶、金属蛋白酶活化。原发性与转移性脑瘤MMPs过度产生和激活，有人采用明胶的SDS-PAGE分析66例白细胞数＜5/μl的脑脊液标本，其中健康对照组19例、恶性星形细胞瘤29例、转移性脑瘤10例、未侵犯中枢神经系统的其它部位肿瘤4例、非肿瘤神经系统疾病4例。分析发现66例标本均可检出明胶酶A前体。而明胶酶B前体仅见于原发性脑瘤（20/20）和转移性脑瘤（10/10），健康组和非脑瘤性疾病均未检出明胶酶B前体。明胶酶A仅见于15例经脑脊液细胞学检查证实为脑瘤和一例脑脊液细胞学检查阴性的胶质瘤患者，但经磁共振扫描证实有肿瘤向脑膜转移。明胶酶B在15例脑癌中有10例阳性。因此检测脑脊液中明胶酶谱可区别恶性胶质瘤或转移脑瘤与非脑瘤肿瘤，并可区别脑膜癌与未向脑膜扩散的脑瘤。MMPs是诊断中枢神经系统肿瘤的一个敏感指标，也是肿瘤复发的早期标志。
五、脑脊液蛋白质的其他检查
1、脑脊液中免疫球蛋白的定量测定
正常脑脊液中免疫球蛋白含量极少，主要为IgG，含量在10~40mg/L。在蛋白总量不高时，一般不能检测出IgA、IgM、IgE等，多发性硬化症、Guillain-Barre综合症、播散性脑脊髓炎等免疫性疾病，可使IgG含量升高。结核性脑膜炎和化脓性脑膜炎时，CSF中IgG和IgA可升高。脑瘤时，IgE可能升高。有人认为，若发现IgM，提示存在中枢神经系统感染（见表4）。其增高的机理，主要是由于血脑屏障功能的破坏和CSF中存在免疫细胞等。
脑脊液中免疫球蛋白的定量检查常采用免疫电泳扩散和免疫散射比浊法。
表4 几种中枢神经系统疾病时脑脊液内免疫球蛋白的改变
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免疫球蛋白 化脓性脑膜炎 病毒性脑膜炎 结核性脑膜炎 脑瘤 神经梅毒 |
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IgA
IgE IgG IgM |
2、脑脊液中β2-微球蛋白（β2-MG）的定量检查
正常脑脊液中含有β2-MG，其水平在1.51±0.72mg/L。许多研究表明，CSF中β2-MG可用于预报中枢神经系统白血病和淋巴瘤的复发。中枢神经系统白血病和淋巴瘤复发者CSF的β2-MG的改变较细胞学诊断早4~8周，其β2-MG水平升高显著；白血病和淋巴瘤累及中枢神经系统时，CSF的β2-MG明显高于未受累者，经化疗后，β2-MG水平随症状体症消失而恢复正常，故β2-MG可作为中枢神经系统是否受累的诊断依据和疗效监测指标。
中枢神经系统感染时，CSF的β2-MG增高，细菌性较病毒性升高明显，结核性较化脓性升高更加明显，故在病原体检出困难，CSF常规检查不典型时，CSF的β2-MG检查对诊断有参考价值。
急性脑梗塞患者脑脊液的β2-MG明显增高，有严重偏瘫的大面积梗塞患者升高更显著，经治疗后β2-MG下降；故β2-MG测定对本病的病情判断和疗效观察有参考价值。
临床实验室常用的方法有酶免法和放免法。
3、脑脊液中C-反应蛋白（CRP）的定量检查
有人报道，经培养证实的细菌性脑膜炎患者24例，脑脊液CRP均为阳性，而脑脊液糖检查18例为阳性、革兰氏染色17例阳性，非细菌性脑膜炎23例中CRP阳性仅两例。因此认为脑脊液的CRP是鉴别细菌性和非细菌性脑膜炎的一项灵敏和特异的诊断指标。
常用的检查方法是免疫散射比浊法。
4、14-3-3脑蛋白的检查 14-3-3脑蛋白大量存在于正常人脑组织中，并不存在于血浆中。有人发现在克-雅氏病病人的71份脑脊液中，对14-3-3脑蛋白进行检测，68例（98%）为14-3-3脑蛋白阳性，而94例其它痴呆病人中仅4例为阳性，且3例为采集脑脊液前1个月内患有脑梗塞，仅一例为阳性。此患者临床拟诊断为AD。在检查66例其它中枢神经系统疾病病人的脑脊液发现18例阳性，这18例阳性病人分别为急性病毒性脑炎、脑梗塞、蛛网膜下腔出血、Reet氏综合征等。这一研究提示：检查14-3-3脑蛋白对克-雅氏病的敏感性为96%、特异性高达99%。
5、脑脊液β-淀粉样蛋白（β-AP）和β-淀粉样蛋白前体（APP）的检查
β-AP是分子量4.2kD的多肽，主要存在于老年斑和Alzheimers病（AD）的脑血管系统，是脑组织固有蛋白。β-AP是大分子APP的异常分解产物。大量研究发现，CSF的APP和β-AP水平可以作为AD诊断以及痴呆严重程度和病程进展的生化指标。有人采用高特异性的ELISA法对CSF的APP研究发现，拟诊AD患者的CSF中APP为0.8±0.4g/L远低于其他痴呆患者（2.9±1.0g/L）和正常值（2.7±0.7g/L）。AD患者脑脊液的β-AP水平与痴呆的严重程度呈显著负相关。
6、脑脊液tau蛋白的检查
tau蛋白是一种重要的微管相关蛋白，对微管的构成和保持稳定起着关键作用。tau蛋白异常磷酸化并转变成双股螺旋神经丝，可导致AD患者脑组织中营养不良轴突的积累和神经纤微缠结。神经元内存在大量神经纤微缠结是AD的重要特征之一。CSF中的tau蛋白主要来自坏死的神经细胞。
AD患者和其他各种原因引起的痴呆CSF中tau蛋白均明显高于对照组，但AD组比其他原因引起的痴呆病例组升高更加明显，表明tau蛋白是CNS神经元变性的一个敏感指标，可用于痴呆的诊断和鉴别。tau蛋白和谷草转氨酶（AST）联合检测对AD的诊断特异性达到了83%，而单纯检测tau蛋白的特异性仅为50%。因此两者同时检测可提高对AD的诊断特异性。
7、层粘蛋白（Laminin LN）
脑脊液LN的正常参考值为27.7±18.2mg/L。中枢神经系统恶性肿瘤CSF的LN含量明显高于对照组，若以45.9 mg/L为临界值，阳性率为79.1%。中枢神经系统良性肿瘤或非中枢神经系统恶性肿瘤CSF的LN水平与对照组相比无明显差异。各种脑膜炎CSF的LN可轻度升高，但显著低于中枢神经系统恶性肿瘤。因此CSF的LN检测是中枢神经系统良、恶性肿瘤鉴别的重要诊断指标。
8、纤维连接蛋白（Fibronectin Fn）
细菌性脑膜炎患者CSF的Fn含量为13.9±6.1mg/L，明显高于对照组的6.7±1.3mg/L。而非细菌性脑膜炎患者的Fn水平（2.2±1.8mg/L）明显低于对照组。细菌性脑膜炎经治疗后CSF的Fn含量下降至正常水平。故CSF的Fn的检测可用于区别细菌性与病毒性脑膜炎。
9、脑脊液铜兰蛋白的检查
正常脑脊液铜兰蛋白的参考范围是1.08±0.56mg/L，化脓性脑膜炎患者CSF铜兰蛋白为9.65±3.96mg/L，脑肿瘤患者CSF的铜兰蛋白含量为4.15±2.18mg/L，后两者均明显高于正常值。若以2.2mg/L作为正常值上限，阳性率分别为100%和82.6%。脑肿瘤术后CSF的铜兰蛋白水平明显下降。因此，铜兰蛋白可作为脑肿瘤诊断、病情监测及疗效观察的较好指标。
10、髓鞘碱性蛋白（Myelin basic protein MBP）
髓鞘碱性蛋白（MBP）是组成中枢神经系统髓鞘的主要蛋白，约占髓鞘蛋白质总量的30%。MBP是反映中枢神经系统有无实质性损害，特别是髓鞘脱失的诊断指标。各种神经系统疾病患者中多发性硬化症（MS）的急性恶化期脑脊液MBP最高，在慢性进展期中等水平增高，且高于缓解期。检测脑脊液MBP对急性期MS的灵敏度为100%，对慢性活动期MS的灵敏度为84.6%，对非活动性MS的灵敏度极低。复发型MS患者急性活动期脑脊液MBP与临床评分和病灶体积高度相关，脑脊液MBP含量在治疗前明显增高及治疗后显著下降的患者，对激素等药物的短程疗效较好。故脑脊液MBP检测对判断MS的病程、病情严重程度、预后和指导治疗很有意义。
此外，重度新生儿缺氧缺血性脑病患儿脑脊液MBP水平明显增高，而中度和轻度组无明显改变。脑积水患者脑脊液MBP也显著增高，且与脑积水的程度呈正相关。
