阿法骨化醇的鉴别及检查方法
鉴别
(1)取本品约0.02mg,加三氯甲烷0.2ml溶解后,加醋酸3滴与硫酸1滴,振摇,初显黄色,瞬间变红色,渐成黄绿色。(2)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。(3)本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致(通则0402)。
检查
有关物质照高效液相色谱法(通则0512)测定供试品溶液取本品适量,加流动相溶解并稀释制成每l中约含0.1mg的溶液。对照溶液精密量取供试品溶液1ml,置100m量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。系统适用性溶液(1)取阿法骨化醇适量,加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液,在日光或钨灯光下照射0.5小时系统适用性溶液(2)取系统适用性溶液(1)2ml,在80℃水浴中加热回流2小时,放冷。色谱条件用硅胶为填充剂;以石油醚(60~90℃)-乙酸酯三氯甲烷(44:42:14)为流动相;检测波长为265nm;进样体积20l系统适用性要求系统适用性溶液(1)色谱图中,反式阿法骨化醇峰相对阿法骨化醇峰的相对保留时间约为0.92,阿法骨化醇峰与反式阿法骨化醇峰之间的分离度应符合要求。系统适用性溶液(2)色谱图中,前阿法骨化醇峰相对阿法骨化醇峰的相对保留时间约为1.3,阿法骨化醇峰与前阿法骨化醇峰之间的分离度应符合要求。理论板数按阿法骨化醇峰计算不低于2000。测定法精密量取供试品溶液与对照溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。限度供试品溶液色谱图中如有杂质峰,除前阿法骨化醇峰外,单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1.0%)。
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