通过甘油分级梯度离心纯化λ噬菌体颗粒实验
实验方法原理 本方案适用于制备噬菌体原种、制备噬菌体颗粒（用来获得 DNA 进行亚克隆）以及制备 λ 噬菌体臂。
实验材料 λ 噬菌体颗粒悬浮液
试剂、试剂盒 EDTA甘油SM胰 DNase Ⅰ
仪器、耗材 Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号离心管
实验步骤
一、材料
1. 缓冲液和溶液
EDTA ( 0.5 mol/L，pH 8.0 )
甘油（5% 和 40%，V/V ) 于 SM 中
SM
2. 酶和缓冲液
胰 DNase Ⅰ (1 mg/ml)
胰 RNase 于 TE 中（1 mg/ml，pH 7.6)
3. 离心机和转子
Beckman SW41 或 SW28 转子或相当型号，配有清亮的离心管（如 Beckman 超亮离心管）
4. 载体和菌株
λ 噬菌体颗粒悬浮液
二、方法
1. 在 Beckman SW41 聚碳酸酯离心管（或相应离心管）中制备甘油分级梯度（每管加 5 ml 噬菌体悬浮液）：
(1) 取 3 ml 含 40% 甘油的 SM，加入至离心管管底。
(2) 在 40% 甘油溶液上小心加入 4 ml 含 5% 甘油的 SM。
(3) 在 5% 甘油的顶层小心加入噬菌体悬浮液，最后用 SM 补满。
2. 分级梯度于 4℃ 151000 g ( 35000 r/min 于 Beckman SW41 或 SW28 转子中）离心 60 min。
3. 去上清，每升培养物原液加 1 ml SM 重悬噬菌体沉淀。
4. 加胰 DNaseⅠ和 RNase 至终浓度分别为 5 μg/ml 和 1 μg/ml，37℃ 温育 30 min。
5. 加 0.5 mol/L 的 EDTA 储液（pH 8.0) 至终浓度为 20 mmol/L。
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