体内哺乳动物骨髓细胞微核试验-1
1范围
本规范规定了哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料的染色体畸变检测。
2规范性引用文件
GB 14924实验动物与饲料标准
OECD Guidelines for Testing of Chemicals（No.481，Adopted:21,July 1997）
3定义
微核 （Micronucleus）：染色单体或染色体的无着丝点断片，或因纺锤体受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期，仍然遗留在细胞质中。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在子细胞的胞质内，因比主核小，故称为微核。
4原理
凡能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物，都可用微核试验来检测。各种类型的骨髓细胞都可形成微核，但有核细胞的胞质少，微核与正常核叶及核的突起难以鉴别。嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，因胞质内含有核糖体，姬姆萨染色呈灰蓝色，成熟红细胞的核糖体已消失，被染成淡桔红色。骨髓中嗜多染红细胞数量充足，微核容易辨认，而且微核自发率低，因此，骨髓中嗜多染红细胞成为微核试验的首选细胞群。
5 试验的基本原则
通过适当的途径使动物接触受试物，一定时间后处死动物，取出骨髓，制备涂片，经固定、染色，在显微镜下计数含微核的嗜多染红细胞。
6 仪器和器械
生物显微镜、解剖剪、镊子、止血钳、注射器、灌胃针头、载玻片、盖玻片（24mm×50mm）、塑料吸瓶、纱布、滤纸等。
7 试剂
7.1小牛血清（灭活）
将滤菌的小牛血清置于56℃恒温水浴保温30min灭活。灭活的小牛血清通常保存于冰箱冷冻室里。
7.2姬姆萨（Giemsa）染液
成分：Giemsa染料 3.8g
甲醇 375mL
甘油 125mL
配制：将染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至375mL和甘油，混合均匀，放置37℃恒温箱中保温48h。保温期间，振摇数次，促使染料的充分溶解，取出过滤，两周后用。
