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动力学法测定酶促反应

2021.3.29

总单位时间内底物减少或产物增加的量。

根据米氏方程和Lambert-Beer定律可推得:

图片6

△A为t2-t1期间反应体系吸光度的变化。

ε为消光系数,L为光径。

从此式可以看出,在t2-t1时间内吸光度的变化与所测物质浓度成正比。

实际操作中,测定两个固定时间的吸光度差值,只要此期间待测物消耗<5%,就可以采用标准浓度对照法计算样本浓度,所以动力学法有时又称为固定时间法。

与终点法相比,动态法测定中待测物无须完全转化,故工具酶的用量较少,为了保证有足够的测定线性,所用酶的Km应足够大。如所用工具酶Km太小,可在反应体系中加入竞争性抑制剂,以加大Km。

动力学法对于测定仪器的要求更严格,动态法由于测定反应动态过程中的吸光度,检测的信号小,温度对测定的影响很大,这要求仪器的电噪声小,吸光度应读准到0.0001,温度变化<0.1%。


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