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反转录病毒原液检测实验——在Tris-Tricine缓冲系统中电泳

2019.3.26
实验材料

蛋白质

试剂、试剂盒

Tricine样品缓冲液考马斯亮蓝染色液乙酸

仪器、耗材

电泳仪离心机

实验步骤

1.  按“Laemmli凝胶电泳法”的步骤1~7,配制溶液并灌制分离胶和积层胶。

 

2.  制备样品,但采用2×Tricine的样品缓冲液,加样前样品于40℃处理30〜60 -11。多肽分子量标准混合物用作多肽分离的对照。

3.  组装电源装置并加样。但加样孔是以Tricine阴极缓冲液或水加以冲洗并以之充满;在电泳装置的下缓冲液槽加入阳极缓冲液,上缓冲液槽加入阴极缓冲液。


4.  连接电源,在30 V 恒压下电泳1 h 后,接着在150 V 恒压下电泳4 h。使用热交换装置使电泳缓冲液槽温度维持室温水平。

5.  当考马斯亮蓝G-250示踪染料到达凝胶的底部时,将电压调回零并断开电源。

6.  取出凝胶,在考马斯亮蓝G-250染色液中染色2 h,接着在10%乙酸水溶液中脱色,每隔30 min 换液1次,直至背景干净为止,需要更高检测敏感度时,推荐采用银染的方法。


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