胰岛素
制法要求
本品应从检疫合格猪的冰冻胰脏中提取。生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。本品为动物来源,工艺中应进行病毒的安全性控制
性状
本品为白色或类白色的结晶性粉末。本品在水、乙醇中几乎不溶;在无机酸或氢氧化钠溶液中易溶。
鉴别
(1)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。(2)照高效液相色谱法(通则0512)试验供试品溶液取本品适量,加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液,取20l,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(pH7.3)20μ、0.1%V8酶溶液201与水140l,混匀,置37℃水浴中2小时后,加磷酸3l对照品溶液取胰岛素对照品适量,加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液,取20l,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(pH7.3)20μd、0.1%VB酶溶液20l与水140l,混匀,置37℃水浴中2小时后,加磷酸3dl色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(5~10μm);以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(取无水硫酸钠28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml,乙醇胺调节pH值至2.3,加水至1000ml)-乙腈(90:10)为流动相A,以乙腈-水(50:50)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温为40℃;检测波长为214nm;进样体积25μl时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图。结果判定供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致
检查
相关蛋白质照高效液相色谱法(通则0512)测定。临用新制,置10℃以下保存。供试品溶液取本品适量,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1m中约含3.5mg的溶液系统适用性溶液见含量测定项下色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(5~10μm);以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(取无水硫酸钠28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml,乙醇胺调节pH值至2.3,加水至000ml)-乙腈(82:18)为流动相A,以乙腈-水(50:50)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温为40℃;检测波长为214nm;进样体积20pl时间(分钟)流动相A(%)动相B(%)33673系统适用性要求调节流动相比例使胰岛素峰的保留时间约为25分钟。其他要求见含量测定项下。测定法精密量取供试品溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图限度按峰面积归一化法计算,A21脱氨胰岛素不得大于5.0%,其他相关蛋白质总和不得大于5.0%。高分子蛋白质照分子排阻色谱法(通则0514)测定供试品溶液取本品适量,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含4mg的溶液。系统适用性溶液取胰岛素单体-二聚体对照品(或取胰岛素适量,置60℃放置过夜),加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中约含4mg的溶液色谱条件以亲水改性硅胶为填充剂(3~10m);以冰醋酸-乙腈0.1%精氨酸溶液(15:20:65)为流动相;流速为每分钟0.5ml;检测波长为276nm;进样体积100l系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,胰岛素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求测定法精密量取供试品溶液,注入液相色谱仪,记录色谱图。限度除去保留时间大于胰岛素峰的其他峰面积,按峰面积归一化法计算,保留时间小于胰岛素峰的所有峰面积之和不得大于1.0%。干燥失重取本品约0.20g,精密称定,在105℃干燥至恒重,减失重量不得过10.0%(通则0831)锌照原子吸收分光光度法(通则0406第一法)测定。供试品溶液取本品适量,精密称定,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。对照品溶液精密量取锌单元素标准溶液(每1m中含10004g)适量,用0.01mo/L盐酸溶液分别定量稀释制成每1ml中含锌0.20g、0.40g、0.60g、0.80g、1.0g与1.2g的溶液测定法精密量取对照品溶液和供试品溶液,在213.9nm的波长处测定吸光度,按标准曲线法计算。限度按干燥品计算,含锌量不得过1.0%细菌内毒素取本品,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并用检查用水稀释制成每1ml中含5mg的溶液,依法检查(通则1143),每1mg胰岛素中含内毒素的量应小于10EU微生物限度取本品0.3g,照非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法(通则1105)检查,1g供试品中需氧菌总数不得过300cfu。生物活性取本品适量,照胰岛素生物测定法(通则211)试验,实验时每组的实验动物数可减半,实验采用随机设计,照生物检定统计法(通则1431)中量反应平行线测定随机设计法计算效价,每1mg的效价不得少于15单位。
含量测定
照高效液相色谱法(通则0512)测定。临用新制,或2~4℃保存,48小时内使用供试品溶液取本品适量,精密称定,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含40单位的溶液。对照品溶液取胰岛素对照品适量,精密称定,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1m中约含40单位的溶液系统适用性溶液取胰岛素对照品,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1m中约含40单位的溶液,室温放置至少24小时色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(5~10pμm)以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(取无水硫酸钠28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml,乙醇胺调节pH值至2.3,加水至1000m)-乙腈(74:26)为流动相;柱温为40℃;检测波长为214nm进样体积20l系统适用性要求系统适用性溶液色谱图中,胰岛素峰与A21脱氨胰岛素峰(与胰岛素峰的相对保留时间约为1.2)之间的分离度应不小于1.8,拖尾因子应不大于1.8。测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以胰岛素峰面积与A2l脱氨胰岛素峰面积之和计算
类别
降血糖药。
贮藏
遮光,密闭,在-15℃以下保存。
制剂
(1)胰岛素注射液(2)精蛋白锌胰岛素注射液(3)精蛋白锌胰岛素注射液(30R)
