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邻--甲酚酞络合酮比色法测定血清总钙实验

2019.4.13

实验方法原理	邻--甲酚酞络合酮是全属洛合指示剂，同时也是酸碱指示剂，在碱性溶液中与钙及镁螯合，生成紫红色化合物。做钙测定时，在试剂中加入8-羟基喹啉以消除标本中镁离于的干扰。
实验材料	血清
试剂、试剂盒	AMP 碱性缓冲液
仪器、耗材	邻--甲酚酞络合酮显色剂
实验步骤	一、实验试剂： l. 邻--甲酚酞络合酮显色剂：称取8一羟基喹啉500mg，置烧杯中。加浓HCL 15ml，使其溶解并转人500ml容量瓶中，再加入邻--甲酚酞络合酮25mg，待完全溶解后，如Tritonx-10Oml混匀，然后加去离子水至刻度置聚乙烯瓶内保存。 2. lmol/L AMP 碱性缓冲液：称取a-氨基-2-甲基-l-丙醇89.14g，置1L容量瓶中，加500ml去离子水溶解待完全溶解加至刻度，置聚乙烯瓶中室温保存。 3. 显色应用液：应用时，根据当日标本的多少将上述两液等量混合。 4. 钙标准液（2.5mmol/L）：准确称取经110℃干燥12h的碳酸钙250mg，地置于1L容量瓶内，加稀盐酸（1份浓HCL加9份去离子水）7ml溶解后，加去离子水900ml，然后用500g/L醋酸铵溶液调PH值至7.0，最后加去离子水至刻度，混匀。二、实验操作：温匀，放5min后，分光光度计波长575nm，10mm光径比色杯用空白管调零，读取各管吸光度。如标本混浊、黄疸、浴血、需做校正试验，于空白管及测定管中各加入5g/L EGTA溶液0.05ml再测吸光度，再次读取的吸光度差，即为校正吸光度。三、计算：血清钙 mmol/L= { [ 测定管吸光度（或校正管吸光度）] / 标准管吸光度 }x2.5 参考值：成人：2.03-2.45 mmol/L 儿童：2.25-2.67 mmol/L 展开
注意事项	1. 用血清或肝素抗凝血浆标本，不能用钙螯合剂（EDTANa₂）及草酸盐作抗凝剂的标本。 2. 邻--甲酚酞络合酮试剂灵敏度很高，所用试管和器皿如有微量的污染亦会引起测定误差，故此，测定最好用一次使用的塑料管，所用进剂应在聚乙烯瓶内保存。如果条件不允许而用玻璃试管和器皿时一定要经稀盐酸清洗，再用去离子水冲净后方可使用。
其他	通过对显色稳定性,线性关系,重复试验及回收试验的观察,以及与其它方法对比,证明本法有灵敏度高,方法简便,稳定性好的特点,可推广应用。本实验来源于牡丹江医学院本科 5 年制检验专业实验指导，《血清钙邻甲酚酞络合酮比色法》。