FITC标记抗体-改良法
FITC标记抗体-改良法
试剂：
1.0.01mol/L pH7.2 配方。将NaCl 18g、Na2HPO4 1.15g、KH2PO4 0.2g，
溶于2000ml三蒸水中，调整pH至7.2；
2.0.5mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液配法。量取0.5mol/L Na2CO3（5.3%）10ml
加入0.5mol/L NaHCO3（4.2%）90ml中，充分混合后，调整pH至9.0；
3.3%中碳酸钠水溶液的配制。称取1.5g无水正碳酸钠充分溶解于50ml三蒸
水中即成；
方法与步骤：
1.根据Marshall氏法高效价的抗人球蛋白兔免疫血清，分离球蛋白；
2.用0.15 mol/L NaCl的盐水及0.15 mol/L pH9.0的NaHCO3-Na2CO3缓冲液稀释使每毫升内含抗体10mg，缓冲液为总量的10%；
3.将以上溶液降温至4℃，按蛋白：荧光素=50—80mg：1mg的比例加入异硫氰酸荧光素，在0—4℃下电磁搅拌12—14h；
4.用半饱和硫酸铵将标记球蛋白沉淀分离，除去未结合的荧光素，再用缓冲盐水透析，除去硫酸铵，最后用Neler氏试剂测验至隔夜透析之盐水无氨离子及荧光色素为止；
5.将制备好的荧光抗体加0.01%的叠氮钠，分装在1ml安培中，或冻干，或保存于4℃冰箱中可以用半年以上，也可于-20℃冰箱保存达2年以上。
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