毛细管电泳仪电动进样质量的控制
毛细管电泳仪电动进样是当毛细管的进样端浸入样品溶液并加上电场E时,组分因电泳和电渗作用而进入毛细管内。由于毛细管内径很小,对进样技术要求很高。
毛细管洗净后,用微量注射器注入缓冲液,然后将其两端分别浸入两个盛有缓冲液的储瓶。电动进样时,将含样品溶液的储瓶代替一端的缓冲液储瓶,通过样品溶液引入进样电压(为分离电压的1/5~1/3),电路按一定时间周期接通,一般是几秒钟接通一次,使进入毛细管的样品区带变窄。然后断电,将缓冲液储瓶代替样品溶液瓶,再通入高压电,使电泳开始。为使电压沿管线分布均匀,应使样品溶液与缓冲液的电导率相近。
电动进样时,在时间t内,进入毛细管的样品质量Q为:
Q =πr2(vep + veo)Ct
= πr2(μep + μeo)ECt
= πr2(μep + μeo)VCt/L
式中:r为毛细管内径,V为毛细管两端的电压,L为毛细管总长度,C为样品浓度。
电动进样的控制参数是电场强度E和进样时间t。其中E通常为1~10kV/60cm;t通常为1~10s,有时可达60s或更大。
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