肿瘤动物模型建立实验
一、肿瘤动物模型建立的意义：
（1）评价抗肿瘤免疫治疗的疗效；
（2）作为抗肿瘤药物筛选模型；
（3）为肿瘤转移研究提供更好的研究平台；
（4）为研发抗肿瘤转移性药物提供良好的实验工具。
二、诱发性肿瘤动物模型
实验方法原理:诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。
实验材料：肿瘤细胞、小鼠性
试剂、试剂盒：无血清培养基质、3%中性甲醇、石蜡
仪器、耗材：低温离心机、血球计数器、游标卡尺
实验步骤：
1、肝癌
（1）二乙基亚硝胺（DEN）诱发大白鼠肝癌
① 取体重250 g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘；
② 按性别分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用 0.25%DEN水溶液灌胃，剂量为10 mg/kg，每周一次，其余5天用0.025%DEN水溶液放入水瓶中，任其自由饮用；
③ 共约4个月可诱发成肝癌；
④ 也可以单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。
（2）4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌
① 用含0.06%DBA的饲料喂养大鼠，饲料中维生素B2 不应超过1.5～2 mg/kg；
② 4～6月就有大量的肝癌诱发成功。
（3）2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌
① 给成年大鼠含0.03% 2AAF标准饲料；
② 每日每平均2～3 mg 2AAF（也可将2AAF混于油中灌喂），3～4月后有80～90%动物产生肝肿瘤。
（4）二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌
① 用剂量为每日0.3～14 mg/kg体重，混于饲料或饮水中给予；
② 6～9个月后255/300大鼠发生了肝癌。
（5）亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌
① 用1%OAAF苯溶液（约0.1 ml含1 mg）涂在动物的两肩胛间皮肤上，隔日一次，每次2～3滴，一般涂100次。
② 实验后7～8周即而出现第一个肝肿瘤，7个月以上可诱发小鼠肝肿瘤约55%。
③ 或用2.5 mg OAAT溶于葵瓜子油中，给C3H小鼠皮下注射4次，每日间隔10天，也可诱发成肝癌。
（6）黄曲霉素诱发大鼠肝癌
每日饲料中含0.001～0.015 ppm，混入饲料中喂6个月后，肝癌诱发率达80％。
2、胃癌
（1）甲基胆蒽诱发小鼠胃癌
① 取20 g左右的小鼠，无菌手术下，在腺胃粘膜面穿挂含甲基胆蒽（MC）线结。
② 含MC的线结是用普通细线，在一端打结后，将线结置于盛有MC小玻璃试管内，在酒精灯上微微加温，使MC液化渗入线结。MC浓度为0.05～0.1 g 20-甲基胆蒽内浸入10～20根线。
③ 手术埋线后4～8个月可诱发成功胃癌。
（2）不对称亚硝胺诱发小鼠胃癌
剂量为0.25 ml/kg体重，3个月后全部动物发生前胃乳头状癌，7～8个月后有85～100%发生前胃癌。昆明种最敏感。A系次之，615系小鼠敏感性最差。
（3）甲基亚硝基醋酸尿素诱发小鼠胃癌
给BD大鼠饮水中加甲基亚硝基醋酸尿素，剂量为2 mg/kg体重，每周饮用5次，520天后全部大鼠均发生了腺胃癌。
3、食管癌
（1）甲基苄基亚硝胺（MBNA）诱发大鼠食管癌
① 取体重100 g以上的Wistar大鼠；
② 任其食用含甲基苄基亚硝胺的饮水，并将MBNA掺入饲料中使每日摄入量达0.75～1.5 mg/kg体重；
③ 80～100天可诱发成食管癌。
（2）二烃黄樟素（Dihydrosafrole）诱发大鼠食管癌
二烃黄樟素是一种制备啤酒的调味品，在大鼠饲料中加入百万分之二千五百至一万（2500～10000 ppm）黄樟素，就能引起20～75%的食管癌。
（3）甲基苄基亚硝胺诱发大鼠食管癌
① 用0.2%或0.005% 的甲基苄基亚硝胺水溶液，给动物经口灌喂，每天一次，大鼠灌注剂量为1 mg/kg体重；
② 至第27天即发现一例食管乳头状瘤，154天发现第一例食管癌， 11个月食管癌的发生率为53%。
4、肺癌
（1）二乙基亚硝胺（DEN）诱发小鼠肺癌
① 小白鼠每周皮下注射1%DEN水溶液一次，每次剂量56 mg/kg，DEN总剂量达到868 mg；
② 观察时间为100天左右时，发癌率可达40%。
③ DEN总剂量达到1176 mg，观察时间为半年左右时；发癌率可达94%。
（2）乌拉坦诱发肺腺癌
① 小鼠（A系， 1～11/2月龄）较大鼠敏感，每次每只腹腔注入10%乌拉坦生理盐水液0.1～0.3 ml，间隔3～5日再注，共注2～3个月，每只小鼠用量约为 100 mg；
② 注后3个月肺腺癌发生率为100%，而且多数为多发性，这种诱发瘤为良性。
（3）苯并芘诱发肺腺癌
① 猴气管内注入3，4-苯并芘（苯并花为3～15 mg与等量之Fe2O3混合液），每周一次，共10次；
② 6只猴中有2只诱发肺的鳞状上皮癌。
（4）硫酸铵气溶胶诱发肺腺癌
① 用硫酸胺气溶剂给100只大鼠吸入；
② 13个月后所有大鼠都发生了肺腺癌。
（5）甲基胆蒽诱发肺腺癌
① 用0.2%明胶作悬浮剂将甲基胆蒽混合后给金地鼠气管内注入，每次0.1 ml（含甲基胆蒽 5 mg）每周一次，共6次；
② 53周后有62.5%动物发生了肺癌。
5、鼻咽癌
（1）二甲基胆蒽（MC）诱发大鼠鼻咽癌
① 取直径2～3 mm的硬质塑米管，在酒精灯上小火拉成锥形，每段长约3.5 cm，管内填以结晶体MC。
② 小管一端用火封闭，以防药物外溢，尖端用针刺数孔，使MC能从小妃溢出。
③ 取体重120 g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，由前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔较小管粗端为小的特点，稍加用力，迫使小管全部进入鼻腔内，其尖部可达鼻咽腔。不需另加固定，即可使小管长期留于鼻腔内。
④ 待到预定时间（半年以上），或动物自行死亡时，到其鼻咽部，10%福尔马林固定，脱钙后，石蜡包埋，进行连续切片。发癌率可达60%以上。
（2）二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌
① 取120 g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平针尖的8号针头，从前鼻孔轻轻插入，针尖可达鼻咽腔；
② 经注射器灌注用1%吐温-80新配的 33.3%DEN混悬液0.0 2 ml(含DEN 6.7 mg)每周1次，共15～20次，可诱发成鼻咽癌。
6、宫颈癌
二甲基胆蒽（MC）诱发宫颈
取雌性小白鼠，以附有0.1 mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，将线穿入宫颈。经右宫角背部穿出，使线结固定于宫颈口。线的另一端则固定于背部肌肉，缝合皮肤，挂线以后，同日开始连续注射青霉素2～3天。以防术后感染。至一定时间（半年左右）处死动物，宫颈组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片。
7、结肠癌
二甲基苄肼（Dimethlhydrazine，DMH）诱发鼻咽癌
① 给四周龄的雄性大白鼠，皮下注射二甲基苄肼（Dimethlhydrazine，DMH）每周一次，连续21周，每次 DMH21 mg/kg；
② 最后一次给药后1～4周，处死动物；
③ 降结肠部位用Bouin液固定，脱水，石蜡包埋，切片。所用之DMH先配成每100 ml含 400 mg的母液，并加EDTA37 mg，用氢氧化纳（0.1 N）液将pH调至6.5备用。
注意事项：
1、要设计不同的实验组和对照组， 每组动物数一般为 5-10 只；
2、一般接种肿瘤6-8 周后，小鼠的肿瘤可生长至直径为 15-20mm ( 即小鼠会濒临死亡) 时， 可眼球取血，分离血清并保存血清， 处死小鼠， 取肿瘤组织照相， 取部分肿瘤组织作 冰冻组织切片( 或 -80℃ 保存)， 作相应的免疫组织化学染色 ， 取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛固定， 石腊包埋， 作常规HE 染色。
其他：
1、芳香胺及偶氮染料类致癌物的特点
（1）通常需要长期、大量给药才能致癌；
（2）肿瘤多发生于远隔作用部位的器官如膀胱、肝等；
（3）有明显的种属差异；
（4）其本身不是直接致癌物，致癌是由于其某种代谢产物的作用；
（5）其致癌作用往往受营养或激素的影响，例如，奶黄仅在以缺少蛋白质和核黄素的饲料喂饲大鼠时才引起肝癌，而且雄性大鼠较敏感，邻位氨基偶氮甲苯则易起雌性大鼠的肝癌。
2、亚硝胺类的致癌特点
（1）致癌性强，小剂量一次给药即可致癌；
（2）对多种动物（包括猴、豚鼠等不易诱发肿瘤的动物）的许多器官（包括食管、脑、鼻窦等不易引起癌的器官）能致癌，甚至可以通过胎盘致癌，如给怀孕大鼠以二乙基亚硝胺（Diethy lnitrosamine,DEN）可比较快地引起仔鼠的神经胶质细胞瘤；
（3）具有不同结构的亚硝胺有明显的器官亲和性，例如二甲基亚硝胺等对称的衍生物常引起肝癌，不对称的亚硝胺如甲基苄基亚硝胺常诱发食管癌；在大鼠，二丁基亚硝胺能引起膀胱癌，二戊基亚硝胺能诱发肺癌，而N-甲基-N-硝基-N-1-亚硝基胍则能引起胃肠癌。
3、黄曲霉毒素的致癌特点
（1）黄曲霉毒素的毒性很强，很小剂量（1mg/kg体重）即可使狗、幼龄大鼠、火鸡或小鸭致死；
（2）其致癌性也极强，最小致癌剂量比亚硝胺还要小数十倍，是已知化学致癌物中作用最强者；
（3）它能诱发多种动物（从鱼到猴）的肝癌，也可引起肾、胃及结肠的腺癌，滴入气管内可引起肺鳞状细胞癌；
（4）注入皮下可引起局部的肉瘤，还有报告认为，它可引起泪腺、乳腺、卵巢等其它部位的肿瘤。
4、其他
在动物实验中早已确定：乙硫氨酸可诱发大鼠肝癌；乌拉坦（氨基甲酸乙酯，C２H５O－CONH２）、氨乙胺可引起小鼠的肺癌；一些卤代烃如四氯化碳、氯仿等可引起大鼠或小鼠的肝癌。
三、自发型肿瘤动物模型
实验方法原理：自发性肿瘤动物模型是指未经人为处理；自然发生的肿瘤动物模型，主要有自发性乳腺癌模型和自发性白血病模型。
实验材料：C3H小、鼠、A系小鼠、CGA小鼠
试剂、试剂盒：受试药
仪器、耗材：记号笔、脚规
实验步骤：
1、自发性乳腺癌小鼠模型类型
① C3H小鼠：繁殖用雌鼠自发性乳腺癌发生率为85%~100%
② A系小鼠： 经产雌鼠乳腺肿瘤发生率为30%~80%
③ CBA小鼠：雌鼠自发性乳腺癌发生率为60%~65%
2、在乳腺左右两侧及乳头部均可发生肿瘤。每只小鼠常见1个以上肿瘤。选择肿瘤数目和大小相近的动物， 配对分组，给予受试药，观察受试药对肿瘤发展的影响。
3、给药方案和给药途径可根据受试药物的特点确定。因自发性乳腺癌发展较缓慢，故采用间歇给药或小剂量连续给药较为合适。
4、结果判定
① 给药后每天观察肿瘤生长情况，记录发生时间和位置；
② 肿瘤结节长到一定程度，每周用脚规测量皮下肿瘤2次。测定肿块的最大径(a)和最小径(b)。肿瘤体积(cm3) = ab2/2；
③ 将肿瘤体积变化对时间作出生长曲线,可由曲线的斜率变化判断药物抑制肿瘤生长的作用,尤其应观察肿瘤能否完全消退。
5、AKR白血病模型
AKR小鼠为白血病高发品系，淋巴细胞白血病发病率雄性76%~90%，雌性为68%~90%。
6、实验用6~12月龄AKR小鼠， 此时鼠的脾和淋巴结肿大，血象异常。
7、经血液检查确诊为白血病后的次日， 配对分组并开始给予受试药，观察结果。
8、结果判定
观察指标：末梢血象,白细胞数,淋巴结和脾大小,动物生存时间。有效者生存期比对照组延长，并根据血象评价药物的诱导缓解和维持缓解作用。
注意事项：
① 在同一品系内,发病率比较稳定,而不同品系间差别甚大。
② 动物乳腺癌发生与遗传基因、乳癌因子(即致乳癌病毒)及激素有关。
③ 饲料的变更有明显影响,要用固定全价营养饲料。
④ 配对分组。
⑤ 各鼠白血病的病程不一,自发瘤确诊后, 实验时应配对分组。
小编寄语
关于肿瘤动物实验，南京欧际拥有一套完善的技术服务管理体系
药物筛选及药理学评价服务
一、抗肿瘤药物筛选服务及药理学评价
1.抗肿瘤药物体外筛选服务（可提供200多种细胞株）
服务目录号
实验名称
实验内容
服务周期
提交结果
样品需要量
参考价格
ECROA001
药物体外筛选细胞增殖检测（MTT法）
肿瘤细胞株药物IC50检测
2周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
600元/样品/一个细胞株
ECROA002
耐药细胞株药物IC50检测
2周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
800元/样品/一个细胞株
ECROA003
正常细胞株药物IC50检测
2周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
600元/样品/一个细胞株
ECROA003
肿瘤细胞株药物单一浓度初筛
1周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
200元/样品/一个细胞株
ECROA004
耐药细胞株药物单一浓度初筛
1周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
300元/样品/一个细胞株
ECROA005
正常细胞株药物单一浓度初筛
1周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
200元/样品/一个细胞株
ECROA006
药物体外筛选细胞增殖检测（CCK-8法）
肿瘤细胞株药物IC50检测
2周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
650元/样品/一个细胞株
ECROA007
耐药细胞株药物IC50检测
2周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
850元/样品/一个细胞株
ECROA008
正常细胞株药物IC50检测
2周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
650元/样品/一个细胞株
ECROA009
肿瘤细胞株药物单一浓度初筛
1周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
250元/样品/一个细胞株
ECROA010
耐药细胞株药物单一浓度初筛
1周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
350元/样品/一个细胞株
ECROA011
正常细胞株药物单一浓度初筛
1周
实验报告
1-2 mg；混合物5 -10mg
250元/样品/一个细胞株
2.抗肿瘤药物裸鼠体内筛选服务
2.1.人体肿瘤裸鼠异种移植模型
模型编号
模型名称
英文名称
服务周期
提交结果
样品需要量
参考价格
ECROM001
人肝癌裸鼠异种移植模型
HepG-2
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM002
人肝癌裸鼠异种移植模型
QGY-7701
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM003
人肝癌裸鼠异种移植模型
SMMC-7721
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM004
人肝癌裸鼠异种移植模型
Bel7402
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM005
人胃癌裸鼠异种移植模型
SGC-7901
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM006
人胃癌裸鼠异种移植模型
MGC-803
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM007
人胃癌裸鼠异种移植模型
BGC-823
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM008
人胃癌裸鼠异种移植模型
MKN-45
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM009
人胃癌裸鼠异种移植模型
HGC-27
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM010
人肠癌裸鼠异种移植模型
HCT-116
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM011
人肠癌裸鼠异种移植模型
SW116
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM012
人肠癌裸鼠异种移植模型
LS-174-T
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM013
人肠癌裸鼠异种移植模型
CL187
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM014
人原位胰腺腺癌裸鼠异种移植模型
BxPC-3
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM015
人食管癌裸鼠异种移植模型
ECA-109
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM016
人肺癌裸鼠异种移植模型
NCI-H460
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM017
人肺癌裸鼠异种移植模型
A549
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM018
人乳腺癌裸鼠异种移植模型
BCaP-37
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM019
人乳腺癌裸鼠异种移植模型
MX-1
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM020
人乳腺癌裸鼠异种移植模型
MDA-MB-231
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM021
人卵巢癌裸鼠异种移植模型
A2780
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM022
人宫颈癌裸鼠异种移植模型
SiHa
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM023
人宫颈癌裸鼠异种移植模型
HeLa
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM024
人膀胱癌裸鼠异种移植模型
EJ
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM025
人膀胱癌裸鼠异种移植模型
T24
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM026
人肾癌裸鼠异种移植模型
Ketr-3
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM027
人前列腺癌裸鼠异种移植模型
PC-3M
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM028
人前列腺癌裸鼠异种移植模型
22RV1
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM029
人前列腺癌裸鼠异种移植模型
C4-2
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM030
人鼻咽癌裸鼠异种移植模型
CNE-2Z
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM031
涎腺腺样囊性癌裸鼠异种移植模型
ACC-2
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM032
人喉表皮癌裸鼠异种移植模型
HeP2
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM033
人舌鳞癌裸鼠异种移植模型
Tca-8113
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM034
人黑色素瘤裸鼠异种移植模型
A375
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM035
人黑色素瘤裸鼠异种移植模型
M14
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM036
人黑色素瘤裸鼠异种移植模型
MV3
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM037
人白血病裸鼠异种移植模型
HL60
六周
研究报告
＞100mg
询价
2.2.人体肿瘤裸鼠原位移植模型
模型编号
模型名称
移植部位
英文名称
服务周期
提交结果
样品需要量
参考价格
ECROM038
人乳腺癌裸鼠原位移植瘤
乳腺
MDA-MB-231
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM039
人肝癌原位移植肿瘤
肝脏
HepG2
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM040
人前列腺癌细胞
泪腺
PC3
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM041
人前列腺癌细胞
泪腺
DU145
六周
研究报告
＞100mg
询价
2.3.小鼠肿瘤模型
模型编号
模型名称
英文名称
服务周期
提交结果
样品需要量
参考价格
ECROM042
小鼠肝癌模型
H22
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM043
小鼠结肠癌
CT26
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM044
小鼠前列腺癌
RM-1
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM045
小鼠宫颈癌模型
U14
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM046
小鼠肺癌模型
Lewis
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM047
小鼠乳腺癌模型
4T1
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM048
小鼠肉瘤模型
S180
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM049
小鼠艾氏腹水模型
EAC
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM050
小鼠黑色素瘤模型
B16BL6
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM051
小鼠黑色素瘤模型
B16F10
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM052
小鼠黑色素瘤模型
B16F1
六周
研究报告
＞100mg
询价
3.动物转移模型
模型编号
模型名称
英文名称
服务周期
提交结果
样品需要量
参考价格
ECROM053
DBA/2小鼠淋巴道转移
P388D1
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM054
C57BL/6小鼠黑色素瘤肺转移模型
B16F10
六周
研究报告
＞100mg
询价
ECROM055
C57BL/6小鼠黑色素瘤肺转移模型
B16BL6
六周
研究报告
＞100mg
询价
4.抗血管生成药物体外筛选服务
服务目录号
实验名称
服务周期
提交结果
样品需要量
参考价格
ECROA034
内皮细胞增殖实验
二周
研究报告
1-2mg
600元/样品
ECROA035
内皮细胞凋亡实验
二周
研究报告
1-2mg
600元/样品
ECROA036
基质金属蛋白酶（MMPs）抑制剂筛选
三周
研究报告
1-2mg
询价
ECROA037
划痕实验（二维；单层内皮细胞伤口法）
四周
研究报告
1-2mg
询价
ECROA038
博伊登小室实验（二维；内皮细胞迁移实验）
四周
研究报告
1-2mg
询价
ECROA039
胶原侵袭实验（三维；内皮细胞迁移侵袭实验）
四周
研究报告
1-2mg
询价
ECROA040
基质胶实验（二维，内皮细胞成血管能力实验）
四周
研究报告
1-2mg
询价
ECROA041
Beads血管生成实验（三维，内皮细胞成血管能力实验）
四周
研究报告
1-2mg
询价
ECROA042
大鼠胸主动脉环血管生成实验（三维，血管原位新生血管能力检测）
四周
研究报告
1-2mg
询价
5.抗血管生成药物体内活性筛选服务
服务目录号
实验名称
服务周期
提交结果
样品需要量
参考价格
ECROA043
鸡胚脲囊膜血管生成实验
四周
研究报告
5-10mg
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ECROA044
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6、化疗药物不良反应治疗药筛选服务
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5-Fu致骨髓移植模型筛选
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标签： 肿瘤动物模型
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