肿瘤动物模型建立实验（二）

2020.5.19

5、鼻咽癌

（1）二甲基胆蒽（MC）诱发大鼠鼻咽癌

① 取直径2～3 mm的硬质塑米管，在酒精灯上小火拉成锥形，每段长约3.5 cm，管内填以结晶体MC。

② 小管一端用火封闭，以防药物外溢，尖端用针刺数孔，使MC能从小妃溢出。

③ 取体重120 g左右的大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，由前鼻孔将上述含MC的塑料小管插入鼻腔，利用前鼻孔较小管粗端为小的特点，稍加用力，迫使小管全部进入鼻腔内，其尖部可达鼻咽腔。不需另加固定，即可使小管长期留于鼻腔内。

④ 待到预定时间（半年以上），或动物自行死亡时，到其鼻咽部，10%福尔马林固定，脱钙后，石蜡包埋，进行连续切片。发癌率可达60%以上。

（2）二乙基亚硝胺滴鼻法诱发鼻咽癌

① 取120 g左右大白鼠，雌雄均可，乙醚麻醉后，用磨平针尖的8号针头，从前鼻孔轻轻插入，针尖可达鼻咽腔；

② 经注射器灌注用1%吐温-80新配的 33.3%DEN混悬液0.0 2 ml(含DEN 6.7 mg)每周1次，共15～20次，可诱发成鼻咽癌。

6、宫颈癌

二甲基胆蒽（MC）诱发宫颈

取雌性小白鼠，以附有0.1 mgMC的棉纱线结在动物不麻醉的状态下，借助于阴道扩张器及磨纯的弯针，将线穿入宫颈。经右宫角背部穿出，使线结固定于宫颈口。线的另一端则固定于背部肌肉，缝合皮肤，挂线以后，同日开始连续注射青霉素2～3天。以防术后感染。至一定时间（半年左右）处死动物，宫颈组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片。

7、结肠癌

二甲基苄肼（Dimethlhydrazine，DMH）诱发鼻咽癌

① 给四周龄的雄性大白鼠，皮下注射二甲基苄肼（Dimethlhydrazine，DMH）每周一次，连续21周，每次 DMH21 mg/kg；

② 最后一次给药后1～4周，处死动物；

③ 降结肠部位用Bouin液固定，脱水，石蜡包埋，切片。所用之DMH先配成每100 ml含 400 mg的母液，并加EDTA37 mg，用氢氧化纳（0.1 N）液将pH调至6.5备用。

注意事项：

1、要设计不同的实验组和对照组，每组动物数一般为 5-10 只；

2、一般接种肿瘤6-8 周后，小鼠的肿瘤可生长至直径为 15-20mm ( 即小鼠会濒临死亡) 时，可眼球取血，分离血清并保存血清，处死小鼠，取肿瘤组织照相，取部分肿瘤组织作冰冻组织切片( 或- 80℃ 保存)，作相应的免疫组织化学染色，取部分肿瘤组织用3%中性的甲醛固定，石腊包埋，作常规HE 染色。

其他：

1、芳香胺及偶氮染料类致癌物的特点

（1）通常需要长期、大量给药才能致癌；

（2）肿瘤多发生于远隔作用部位的器官如膀胱、肝等；

（3）有明显的种属差异；

（4）其本身不是直接致癌物，致癌是由于其某种代谢产物的作用；

（5）其致癌作用往往受营养或激素的影响，例如，奶黄仅在以缺少蛋白质和核黄素的饲料喂饲大鼠时才引起肝癌，而且雄性大鼠较敏感，邻位氨基偶氮甲苯则易起雌性大鼠的肝癌。

2、亚硝胺类的致癌特点

（1）致癌性强，小剂量一次给药即可致癌；

（2）对多种动物（包括猴、豚鼠等不易诱发肿瘤的动物）的许多器官（包括食管、脑、鼻窦等不易引起癌的器官）能致癌，甚至可以通过胎盘致癌，如给怀孕大鼠以二乙基亚硝胺（Diethy lnitrosamine,DEN）可比较快地引起仔鼠的神经胶质细胞瘤；

（3）具有不同结构的亚硝胺有明显的器官亲和性，例如二甲基亚硝胺等对称的衍生物常引起肝癌，不对称的亚硝胺如甲基苄基亚硝胺常诱发食管癌；在大鼠，二丁基亚硝胺能引起膀胱癌，二戊基亚硝胺能诱发肺癌，而N-甲基-N-硝基-N-1-亚硝基胍则能引起胃肠癌。

3、黄曲霉毒素的致癌特点