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核酸扩增—普通聚合酶链反应

2021.5.12

  把DNA分子变性后解链,两条单链DNA分别经复性与两条引物互补结合,在4种dNTP存在和合适的条件下,由DNA聚合酶催化引物由5'到3'扩增延长,每经过变性、复性、延伸一个循环,模板DNA增加1倍,新合成的DNA链又可作为下一个循环的模板,经过30-50个循环,可使原DNA量增加几百万倍。PCR具备特异、敏感等许多优点。 PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法,主要由高温变性聚合酶链反应、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成。即在高温(95℃)下,待扩增的靶DM~双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(72℃):下,以引物3'端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5'→3'方向延伸,合成DNA新链(因其反应过程有高温,所以反应所用的聚合酶必须为热稳定DNA聚合酶)。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的指数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106~107倍。

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