植物细胞骨架的显示及光镜观察
实验概要
植物细胞骨架的显示及光镜观察
实验原理
细胞内由微丝、微管、中间纤维等交织形成一个十分复杂的立体网络结构。它们对于细胞形状的保持、细胞内物质运输、细胞运动、细胞内各结构相对位置的固定都有重要作用，故而称为细胞骨架。
细胞骨架在通常固定条件下不稳定，如低温、高压、酸处理等。当采用适当的手段，如M-缓冲液洗涤细胞，可以提高细胞骨架的稳定性，戊二醛在室温下固定能较好的保存细胞骨架的成分，另外，Triton X-100处理能抽取掉一部分 杂蛋白，可使骨架成分显现的更加清晰。
微丝、微管、中间纤维等都是直径很小的结构。最大的单根微管才25nm左右，只能在电镜下才能看见，目前研究细胞骨架的主要方法是应用高压电镜或免疫荧光显微技术，本实验用普通光镜观察到细胞骨架，是因为骨架纤维成束分布，结构经染色以后，有夸大作用。由于细胞经Triton
X-100提取剩下的主要成分是细胞骨架成分，使得显现等价清晰。
主要试剂
M-缓冲液（配制方法如下）：
咪唑 2.90g
KCl 3.70g MgCl2 0.012g
EGTA 0.38g EDTA 0.042g
巯基乙醇 0.086ml 加水到 1000 ml
6mM磷酸缓冲液
KH2PO4 0.74g
Na2HPO4•12H2O 2.4g
加水到 1000 ml
１％Triton X-100：以M-缓冲液配制
３％戊二醛： 25％戊二醛 12 ml 6nm磷酸缓冲液 88 ml
染料： 考马斯亮蓝 R-250 0.2g 冰醋酸 7 ml
甲醇 46.5 ml 蒸馏水 46.5 ml
主要设备
器材：显微镜、烧杯、吸管、镊子、载片、盖片
实验材料
材料：洋葱鳞茎
实验步骤
１.撕取洋葱鳞茎内表皮表皮细胞（约1cm2）若干片置于盛有6mH pH6.8磷酸缓冲液中，使其下沉。
２.吸去磷酸缓冲液，加入１％Triton X-100处理２０－３０分钟
。
３.吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗三次，每次三分钟。
４.３％戊二醛固定３０－６０分钟。
５.pH6.8磷酸缓冲液洗三次，每次十分钟。
６.0.2%考马斯亮蓝 R-250染色20-30分钟。
７.用蒸馏水洗1-2次，细胞置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察，就可以看到由微丝、微管组成的网络。
